參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：香菇源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒

產(chǎn)品貨號：YS-P013321

產(chǎn)品規(guī)格：50次

產(chǎn)品分類：PCR檢測試劑盒

產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。

特點(diǎn)優(yōu)勢：

1.   特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達(dá)到。

2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為。

3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時，可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。

4.   實(shí)用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。

5.   優(yōu)勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

6.   優(yōu)勢2：該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐

的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
實(shí)驗(yàn)過程：

一、試劑準(zhǔn)備

1. DNA模板

2．公司產(chǎn)品僅用于科研對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．10×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶

二、操作步驟

1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer             5μl

dNTP mixl                 4μl

引物1（10pM）               2μl

引物2（10PM）              2μl

Taq酶（2U/μl）            1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl

加ddH2O至               50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

使用方法：

一、樣品采集：

1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。

2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。

3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。

4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照。

2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（最好用帶芯槍頭，下同）。

4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用

6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

人糖原合成酶激酶3α(GSK3α)木犀草素末端補(bǔ)體復(fù)合物抗體

人酰基化饑餓素(A-GHRL) 木犀草素（標(biāo)準(zhǔn)品）8號染色體開放閱讀框55抗體

人色素C氧化酶(COX) 熊果酸補(bǔ)體C4a+C4b蛋白抗體

人特異性巨噬武裝因子(SMAF) 熊果酸；烏蘇酸(標(biāo)準(zhǔn)品)CD44V7抗體

人補(bǔ)體因子H相關(guān)蛋白5(CFHR5)香葉木素CD44V10抗體

人輕肽鐵蛋白(FTL)香葉木素（標(biāo)準(zhǔn)品）CD44V4抗體

人重肽鐵蛋白(FTH)金雀花堿,野靛堿緊密連接蛋白4抗體

人Pirin蛋白(PIR)金雀花堿,野靛堿（標(biāo)準(zhǔn)品）6號染色體開放閱讀框140抗體

人多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MRP1)厄貝沙坦L型鈣通道蛋白抗體

人突觸足蛋白(SYNPO)5'-O-(4,4'-二甲氧基三苯基)-胸苷-3'-O-丁二酸電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體

人突觸素(SYP)水楊苷緊密連接蛋白3抗體

人突觸體相關(guān)蛋白25(SAP25)水楊苷(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化原癌基因c-Jun抗體

人褪黑素(MT)厚樸酚磷酸化原癌基因c-Jun抗體

人脫氫表雄酮(DHEA) 厚樸酚(標(biāo)準(zhǔn)品)1號染色體開放閱讀框86抗體

人脫氫表雄酮S7(DHEA-S7) 埃索美拉唑鎂(三水)8號染色體開放閱讀框59抗體

人脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S) 蘆丁/蕓香葉苷磷酸化補(bǔ)體成分5受體1抗體
香菇源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒DRD4  多巴受體D4抗體二氫 99%

DRD5/Dopamine Receptor D5  多巴受體D5抗體二氫 Kosher, FCC, ≥99%

DBC1  膀胱癌缺失基因1二芐 97%

Phospho-DBC1 (Thr454)  磷酸化膀胱癌缺失基因1二芐 ≥98%, FCC

DBH  多巴β羥化酶抗體正癸酸 ≥98%, FCC, FG

DCC  結(jié)腸直腸癌缺失基因抗體癸 natural, ≥92%

DCIR/CLEC4A  C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族4成員A抗體庚酸乙酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)

DCN/Decorin   核心蛋白聚糖抗體庚酸乙酯 CP,97%