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人免疫缺陷病毒I型通用RT-PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2021-11-20 14:56:11瀏覽次數(shù):130次

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規(guī)格 50次 貨號 YS-P013428
品牌 YSRIBIO
人免疫缺陷病毒I型通用RT-PCR試劑盒原理是由一對引物介導(dǎo),能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經(jīng)過n個熱循環(huán)擴增,擴增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

人免疫缺陷病毒I型通用RT-PCR試劑盒

50次

YS-P013428

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

 

QQ截圖20191211135002.jpg 

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學(xué)中zui小檢出率為3個細菌。

(3) 簡便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴增反應(yīng)。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

(4) 對標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。

大鼠I型膠原α1(COL1α1)酰磷標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,體:酮)組織蛋白酶G抗體

大鼠質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)Amberlite® XAD16非離子型大孔樹脂(20-60 mesh)激分子B7-1蛋白抗體

大鼠質(zhì)金屬蛋白酶12(MMP-12)草(標(biāo)準(zhǔn)品)1號染色體開放閱讀框145抗體

大鼠質(zhì)金屬蛋白酶13(MMP-13)草標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)20號染色體開放閱讀框186抗體

大鼠間粘附分子1(sICAM-1/CD54)草標(biāo)準(zhǔn)溶液(549mg/L,體:)角蛋白7抗體

大鼠降鈣素(CT) 殺螟丹(標(biāo)準(zhǔn)品)間隙連接蛋白26抗體

大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH) 殺螟丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=3%)膜輔蛋白抗體

大鼠骨保護素(OPG)殺螟丹標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=3%)F肌動蛋白α1亞抗體

大鼠催乳素(PRL)莎稗磷(標(biāo)準(zhǔn)品)CD8抗體

大鼠肌紅蛋白(MYO)草(標(biāo)準(zhǔn)品)CD8抗體

大鼠肌鈣蛋白T(Tn-T)草標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=2%)表面趨化因子受體2抗體

大鼠肌鈣蛋白I(Tn-I)草標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=3%)胱抑素B/半胱氨酸蛋白酶抑制劑B抗體

大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPPA)三唑錫(標(biāo)準(zhǔn)品)趨化素樣蛋白抗體

大鼠堿性磷酸酶(ALP) Amberlite® IRA410 離子交換樹脂(719(202)是高等級凝膠強堿Ⅱ型陰離子交換樹脂)角蛋白20抗體

大鼠神經(jīng)特異性烯化酶(NSE)磷酸二氫銨(分析標(biāo)準(zhǔn)品,用于凱氏定氮法氮測定,≥99.5%)鈣激活的中性蛋白酶2抗體

大鼠胰高血糖素樣肽1(GLP-1) 磷酸二氫銨(for HPLC,≥99.0%(T))CD45RO抗體
人免疫缺陷病毒I型通用RT-PCR試劑盒Kif14 protein   驅(qū)動蛋白家族Member14蛋白抗體4-溴丁酸 98%

KIF17  驅(qū)動蛋白家族KIF17抗體二聚環(huán)戊二烯 97%,Endo

Kiss-1  腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因抗體二聚環(huán)戊二烯 98%,Endo + Exo

Klf4  腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子/上皮鋅指蛋白4抗體二聚環(huán)戊二烯 97%,Exo

KLF5  腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗體橄欖油 CP

phospho-Kinesin 5B (Ser272)  磷酸化Kinesin 5B抗體橄欖油 藥用級,Ph Eur

phospho-Kinesin 5B (Ser275)  Kinesin 5B抗體亞磷酸三酯 98%

KLF2  肺Kruppel樣因子抗體二茂鐵 98%


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