細胞培養步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備MEM培養基(MEM:GIBCO,貨號11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，貨號16000-044)，15%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1.棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4.將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

公司向您推薦Primarker™人血管內皮細胞鑒定試劑盒說明書的詳細說明：

細胞株的培養和傳代培養：
用于檢測細胞因子的細胞株通常培養于含10％小牛血清和抗生素的培養液中，培養對細胞因子有依賴性的細胞株時還有加入適量細胞因子。在37℃ 5％ CO2 的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養，根據細胞生長特性，在適當的時候進行傳代，一般3～4 天傳代一次。
懸浮生長細胞的傳代：
直接離心后吸去培養上清液，用新鮮培養液稀釋懸浮細胞，一般按1：2-1：5 稀釋細胞后，分瓶繼續培養。
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實驗操作步驟：
a．采用認可的方案處死人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞嚙齒動物。   
b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。 
c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。   
d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。   
e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。   
f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。
實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個； 人皮膚成纖維細胞,CCC-HSF-1細胞
3、50ml離心筒2個
4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；

大鼠腎上腺髓質素（AM）基因重組表達載體（pCMV5-AM）感受態菌DH-5α 進口/國產 規格：1毫升

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Primarker™人血管內皮細胞鑒定試劑盒說明書蒼術素英文名稱：Atractylodin分子式：182.22分子量：C13H10O號：55290-63-6

磺胺嘧英文名稱：SD分子式：250.28分子量：C10H10N4O2S號：68-35-9

(S)-(+)-DBD-APy分子式：311.36英文名稱：（S）-（+）- DBD治療號：143112-50-9分子量： C12H17N5O3S

1,8-雙二甲萘分子式：216英文名稱：1,8- bis two號：20734-58-1分子量： C14H20N2

核固紅英文名稱：Nuclear fixation分子式：357.28分子量： C14H8NNaO7S號：6409-77-4

鄰二甲分子式：106.17英文名稱：Ortho xylene號：95-47-6分子量： C8H10； H3C-(C6H4)-CH3

2,4-二氯噻吩[2,3-D]嘧分子式：205英文名稱：2,4- two [2,3-D]號：18740-39-1分子量： C6H2Cl2N2S

3,6-二溴-9-乙咔唑分子式：353.06英文名稱：3,6- dibromo -9- ethylcarbazole號：33255-13-9分子量： C14H11Br2N

2--3-甲-5-氟吡分子式：126.1315832英文名稱：2- amino -3- -5-號：886365-56-6分子量： C6H7FN2

5-硝水醛英文名稱：5- nitro group分子式：167.12分子量： C7H5NO4號：97-51-8

3--5-甲氧異吡分子式：149.1英文名稱：3- amino -5-, a號：1045855-60-4分子量： C7H7N3O