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細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
PrimaCell™大鼠小腦顆粒細胞試劑盒說明書 | 6次/盒 | YS-X6812 |
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2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
培養操作:
1)復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加 入 4mL 培養基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,棄去上清液,補 加 1-2mL 培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培 養過夜(或將 細胞懸液加入 10cm 皿中,加入約 8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并 檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培 養箱中消化 1-2 分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分 變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養 瓶后加少量培養基終止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為類;
1. 細胞凍存時,棄去培養基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,細胞變圓 脫 落后,加入 1ml 含血清的培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞,根據細胞數量加 入血 清和 DMSO,輕輕混勻,DMSO 終濃度為 10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液,注意凍 存管做好標識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80 度冰箱,2 個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.
冰凍切片免疫組織化學AP酶聯NBT/BCIP基礎檢測試劑盒(無一抗和二抗) 進口/國產 規格:50次
蛋白酶抑制劑混合 進口/國產 規格:保留細胞內成分活性A、 動物細胞B、 細菌C、 酵母菌D、 植物
石蠟切片組織NF KAPPA B P50蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒 進口/國產 規格:10/20次
免疫細胞化學AP酶聯NBT/BCIP*間接檢測試劑盒(含一抗和AP二抗) 進口/國產 規格:10次
細胞誘導型巨噬細胞合成酶(iNOS /NOS2/mNOS)活性比色法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
細胞RSE激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產 規格:20次
Cr. Neoformans RFLP基因分析試劑盒 進口/國產 規格:20次
細胞西尼羅病毒蛋白酶(WVV PROTEASE)活性熒光淬滅法定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
組織MUSK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產 規格:20次
細菌β-內酶報告基因活性熒光定量檢測試劑盒 進口/國產 規格:20次
高效相色譜(HPLC)分析 進口/國產 規格:20樣本
細胞JAK3激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 進口/國產 規格:20次
PrimaCell™大鼠小腦顆粒細胞試劑盒說明書2-氯-3-硝-5-(三氟甲)吡分子式:226.54英文名稱:2- -3- nitro -5- (three f) pyridine號:72587-15-6分子量: C6H2ClF3N2O2
異丁司特分子式:230.31英文名稱:The special號:50847-11-5分子量: C14H18N2O
2-乙酰-3-溴-5-甲吡分子式:229.07英文名稱:2- acetyl -3- -5-號:142404-83-9分子量: C8H9BrN2O
非洛地平分子式:384.25英文名稱:Felodipine號:72509-76-3分子量: C18H19Cl2NO4
間硝三氟甲分子式:191.11英文名稱:Three fluorine toluene號:98-46-4分子量: C7H4F3NO2
1-正丁-4-[(4-乙氧)乙炔]分子式:278.39英文名稱:1- butyl -4-[(4-) - phenyl group號:85583-83-1分子量: C20H22O
2,5-二氯-3-(二氟甲)吡分子式:197.998英文名稱:2,5- two -3- (two Fu Jiaji) pyridine號:71701-93-4分子量: C6H3Cl2F2N
1,4-二(溴甲)-2-甲氧-5-(2-乙己氧)分子式:422.2英文名稱:1,4- two (Xiu Jiaji) -2-, -5- (2-), benzene號:209625-37-6分子量: C17H26Br2O2
4-溴-5--1H-1,2,3-三唑分子式:224英文名稱:4- -5- three號:21505-14-6分子量: C8H6BrN3
鄰溴分子式:282.9英文名稱:O-iodine Bromophenyl號:583-55-1分子量: C6H4BrI
4-(6-氯-3-噠嗪)啉分子式:199.64英文名稱:4- (6- -3-) Ma Lan號:17259-32-4分子量: C8H10ClN3O
培養細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
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