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琥珀酸脫氫酶(SDH)樣本的前處理

時(shí)間:2021/8/26閱讀:376
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琥珀酸脫氫酶(SDH)樣本的前處理:

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:

1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器

或研缽勻漿。

2、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。

3、 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。

4、 上清液即胞漿提取物,可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 α-KGDH(此步可選做)。

5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或

200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復(fù) 30 次),用于線粒體 α-KGDH 活性測(cè)定。

測(cè)定步驟

1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定

(1)在試劑五中加入 18mL 試劑四充分溶解,置于 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)

水浴 10min;現(xiàn)配現(xiàn)用;

(2)在試劑六中加入 1mL 蒸餾水,充分溶解待用;現(xiàn)配現(xiàn)用;

(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、10μL 試劑六和 180μL 試劑五,混

勻,立即記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,計(jì)算 ΔA=A2-A1。

嗜酸性粒細(xì)胞過(guò)氧化物酶抗體

核酸內(nèi)切酶G抗體

酪氨酸蛋白激酶受體A10抗體

胞吐囊復(fù)合體蛋白2抗體

磷酸化4E結(jié)合蛋白1抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體

泛素交聯(lián)酶抗體

EB病毒核抗原抗體-3B抗體

磷酸化驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1抗體

乙酰基轉(zhuǎn)移酶EID1抗體

微管相關(guān)蛋白EB家族3抗體

真核翻譯起始因子5抗體

遺傳性前列腺癌蛋白2抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體

磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1抗體

染色體區(qū)域穩(wěn)定蛋白/核輸出蛋白1/染色體區(qū)域穩(wěn)定必需蛋白抗體

上皮細(xì)胞微管相關(guān)蛋白7抗體

堿性鞘磷脂酶7抗體

表皮生長(zhǎng)因子樣重復(fù)折疊1結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體

長(zhǎng)鏈脂肪酸延長(zhǎng)酶長(zhǎng)ELOVL6抗體

酪氨酸蛋白激酶受體A6抗體

酪氨酸蛋白激酶受體A3抗體

酪氨酸蛋白激酶受體A7抗體

酪氨酸蛋白激酶受體B1抗體

磷酸化酪氨酸蛋白激酶受體B1抗體


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