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NADP蘋果酸酶(NADP-ME)操作步驟

時間:2021/7/7閱讀:319
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NADP蘋果酸酶(NADP-ME)操作步驟:

1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在第一、第二孔中分別加標準品100μl,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;然后從第一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。
2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
7.溫育:操作同3。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

BCIP/INT 100ml原裝 Amresco E692
b-Cyclodextran 5g/25g原裝/100g原裝 Sigma C4767
(b-環狀糊精)
BDliverVealAgar 500g原裝 BD 259100
BeefExtract 500g原裝/500g BD211520/國產
(牛肉膏)
BeefPowder 500g/北京產1kg OXOID LP0029
(牛肉粉)
Benzamidine,HCI 5g/25g Amresco分裝
(鹽酸苯甲脒,鹽酸芐脒)
BenzamidineHCL 5g/10g/25g/100g原裝 Amresco 0616
(芐脒)
BES 10g/25g/100g原裝 Sigma B9879
(N,N-雙
Betaine 50g/100g/1kg原裝 Sigma B2629
(甜菜堿)
BetaineHCl 100g/250g/1kg原裝 Amresco K186
(甜菜堿鹽酸鹽)
b-Glycerophosphatedisodium 10g/25g/100g/500g原裝 Sigma G6251
(b-甘油磷酸鈉)

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