人正常組織來源細(xì)胞消化的一般程序步驟，細(xì)節(jié)操作，我這里就不講了，只講一些基本操作背后的知識，如有不妥之處，歡迎指正，一起討論：

1. 絕大部分細(xì)胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可。吸去胰酶后，殘留的那些無法計算體積的附著在細(xì)胞表面的微量胰酶在37℃一般不到2min足夠消化細(xì)胞（絕大部分1min不到）。對于這些細(xì)胞原則上不要用胰酶孵育細(xì)胞，連續(xù)這樣傳代，對細(xì)胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去，胰酶潤洗吸去，然后37℃消化。

2.什么算是消化好了呢？不是細(xì)胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了，一般你肉眼觀察貼壁細(xì)胞層，只要能移動了，多半呈沙壯移動，其實已經(jīng)可以了，很多人喜歡把細(xì)胞消化或者吹打成*分離細(xì)胞，這是沒有必要的。一般能移動了，說明細(xì)胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了，細(xì)胞之間的附著也已經(jīng)消失了，細(xì)胞已經(jīng)獨立分布了（雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布）。這個時候應(yīng)該停止消化，不要等到看到鏡下所有細(xì)胞都分離得非常好，間隙很大，才停止。細(xì)胞就是*成單個細(xì)胞懸液，之后在貼壁的過程中仍然會聚集，這個是貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，尤其是腫瘤細(xì)胞的一個特性，無論死活的細(xì)胞都是如此，你可以嘗試，準(zhǔn)備的單個細(xì)胞懸液，貼壁后觀察細(xì)胞，仍然是幾個幾個細(xì)胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細(xì)胞也是如此，容易聚集，不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細(xì)胞懸液（不要笑，這個是初養(yǎng)懸浮細(xì)胞的人常犯的錯誤，以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開）。細(xì)胞只要能從基質(zhì)上脫離下來，這個時候即使是成片的（比如Calu-3細(xì)胞），吹打不超過20次后（一般10次即可），成小規(guī)模聚集（10個細(xì)胞左右），是正常的，不要試圖再去延長消化時間，或者象有的同學(xué)那樣吹打1h，等待單細(xì)胞懸液出現(xiàn)。

3.另一個帖子里提到一個比較復(fù)雜的四步消化法，這個挺有意思，我也是*次聽說，應(yīng)該是網(wǎng)友自己發(fā)展出來的方法，很有參考價值。但我估計這個方法可能對付少數(shù)非常怪異的細(xì)胞才需要這么復(fù)雜的程序。我目前養(yǎng)過的近300株細(xì)胞里面，還沒遇到這么怪異的。比如Caco2其實是很好消化的細(xì)胞，不需要胰酶孵育即可，只是有點成片分布。不要以為成片分布是自己沒養(yǎng)好，這個視細(xì)胞而定。如果和標(biāo)準(zhǔn)形態(tài)不一致，那可能是自己沒消化好導(dǎo)致的，但如果消化方法正確，仍然成片分布，甚至*吹打成單細(xì)胞懸液，貼壁后仍然成片分布，這是細(xì)胞的特性，是因為貼壁過程中重新聚集了。這個時候你拼了命要去讓它均勻分布，你的細(xì)胞之后會對你越來越不好。

4.比較難消化的細(xì)胞（潤洗方法5min還不能消化），就以coloncancer為例，比如HCT15,LS411和KM12，這樣的細(xì)胞一般需要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mm dish，一次Z多加入500ul，就足夠了，一般我加300ul。即使這樣難消化的細(xì)胞，一般不超過5min，即可見細(xì)胞成片移動，就應(yīng)該停止消化。一些正常細(xì)胞也會有難消化的時候，比如tsDC細(xì)胞，但也只要用少量胰酶孵育，3min左右即可看到成片沙狀移動。

5，常規(guī)的細(xì)胞實驗（增殖，凋亡，遷移，分化之類的），受消化影響不是很大，如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化（難消化細(xì)胞例外）即可。但少數(shù)實驗，比如病毒包裝，對細(xì)胞代數(shù)，對細(xì)胞狀態(tài)要求*。這個時候，胰酶消化，就是潤洗，都會對人正常組織來源細(xì)胞包裝病毒的能力有影響，傳代次數(shù)一多，細(xì)胞包裝能力就會逐漸下降（當(dāng)然也有其它因素影響包裝效率）。這個時候都不用胰酶消化，用一些鹽溶液（不是EDTA液）即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關(guān)酶的活性，來使得細(xì)胞脫離基質(zhì)附著表面，但不切割任何蛋白。

1 x 10^6 cells/vial 人小腦顆粒細(xì)胞 HCGC

1 x 10^6 cells/vial 人海馬趾神經(jīng)細(xì)胞 HN-h

1 x 10^6 cells/vial 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-貼壁生長 HOPC

5 x 10^6 cells/vial 人少突膠質(zhì)前體細(xì)胞-懸浮生長 HOPC-os

1 x 10^6 cells/vial 人少突膠質(zhì)細(xì)胞 HO

1 x 10^6 cells/vial 人星形膠質(zhì)細(xì)胞 HA

5 x 10^6 cells/vial 人星形膠質(zhì)細(xì)胞 HA

10 x 10^6 cells/vial 人星形膠質(zhì)細(xì)胞 HA

5 x 10^5 cells/vial 人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞 HA-c

5 x 10^5 cells/vial 人脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞 HA-sp

5 x 10^5 cells/vial 人海馬星形膠質(zhì)細(xì)胞 HA-h
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