細胞簡介：

小鼠腎上腺皮質分離自腎上腺組織；腎上腺是人體相當重要的內分泌器官，由于位于兩側腎臟的上方，故名腎上腺。腎上腺左右各一，位于腎的上方，共同為腎筋膜和脂肪組織所包裹。左腎上腺呈半月形，右腎上腺為三角形。從側面觀察，腺體分腎上腺皮質和腎上腺髓質兩部分，周圍部分是皮質，內部是髓質。腎上腺內部是髓質部分，分泌腎上腺素和去甲腎上腺。這些激素在應激狀態釋放增多，能夠幫助升高血壓，加快心率，升高血糖，動員全身的儲備物質，為機體與外界環境的抗爭作好充分準備。腎上腺外部是皮質部分，分泌醛固酮、皮質和少量的雌雄激素。醛固酮能夠促進小便中尿鉀的排出和尿鈉的重吸收，正常數量的醛固酮，對維持人體正常血壓有重要作用。但是如果過多分泌，會導致高血壓和低血鉀。皮質是人體必需的激素之一。當人體處于應激狀態時，比如感冒，發燒，遇到突發事件的時候，腎上腺皮質分泌大量的皮質，這些皮質能夠動員機體的存儲能源，為應對內部或者外部重要事件提供充分的物質準備。當皮質缺乏時，機體在遇到重大事件的時候，往往缺乏足夠應對能力，容易被病毒或外界壓力所擊倒。腎上腺產生的雄激素，對男性來講，并非必不可，但是對女性而言，是雄激素的一個重要來源。
方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠腎上腺皮質采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：

公司實驗室分離的小鼠腎上腺皮質經3β-HSD免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，

2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預冷的PBS中，盡可能的除去結締組織等，

3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養瓶中，倒置于細胞培養箱中，

4) 2h后，培養瓶中注入2 mL內皮培養基，小心將培養瓶正置于培養箱，確保組織塊不會飄起來，

5) 每3d換液2mL，待細胞從組織塊中爬出來后，隔2d換液，待細胞融合達到60-70%左右時，去除組織塊，將肺微血管內皮細胞重新鋪瓶。

1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：

取出T-25cm2培養瓶，75%酒精擦拭培養瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中靜置4-6小時或過夜，以穩定細胞狀態，然后換用新鮮培養液繼續培養或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml培養基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，放入37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）待細胞貼壁后，觀察培養結果，之后進行換液培養或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.125%消化液約2ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入培養液終止消化，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1500rpm/min，離心5min；

3）用適當量的凍存液（基礎培養基：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉入液氮中進行長期保存。

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具）， 快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至15ml無菌離心管中，滴加入培養液5ml混勻細胞，然后將細胞懸液轉移至適當面積大小的培養皿中；

3）放置于37℃，5%CO2細胞培養箱中培養；

4）第二天，換用新鮮培養基繼續培養。