實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    小鼠背根神經元細胞

2.組織來源：脊髓組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠背根神經元細胞分離自脊椎背根神經節；感覺神經母細胞發出軸突，呈束狀，左右對稱地從神經管的背部進入，此時的脊神經節即改稱為背根神經節。神經系統最基本的結構和功能單位是神經元，即神經細胞，其大小和外觀在中樞神經系統中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體，內含神經絲、微管、內質網、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經元突起的粗面內質網可用Nissl染色顯示，在光鏡下是灰藍色斑塊狀，稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經元的突起，能在神經元之間傳遞電沖動，突起的大小和形態各不相同，很難用常規的顯微鏡鑒別。脊髓背根神經節是周圍神經的主要傳入神經元，是感覺信號傳導的中繼站。背根神經元細胞的獲取較為困難，需要在盡可能短的時間內通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經節組織。神經組織體外培養方法是當代神經科學一項很有價值的研究手段，背根神經節富含周圍神經系統感覺神經元，已廣泛用于軸突的導向及再生、中樞及周圍神經系統的髓鞘形成、神經營養因子作用及受體分布、神經細胞衰老機制、基因治療、組織工程等神經科學的研究。

5.方法簡介：

()實驗室分離的小鼠背根神經元細胞采用膠原酶&聯合消化法、神經元專用培養基培養篩選結合化學試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的小鼠背根神經元細胞經β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

包被條件PLL（0.1mg/ml）

培養基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-M166

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態神經元細胞樣

傳代特性屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

5次 填入法DNA末端標記試劑盒C Fill-in DNA End Labeling Kit -20℃保存 31.2-2000 pg/mL ELISA Kit for Human Angiomotin

2 ug pGLuc basic pGLuc basic 低溫運輸，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人雙特異性3(DUSP3)ELISA試劑盒

瓊脂培養基N Agar medium N (Cetrimide agar) 250g 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Hum?嵌?L?

小鼠背根神經元細胞ZNF471  鋅指蛋白471抗體 規格: 0.2mlphospho-ERK5( Ser731+Thr733)  磷酸化細胞外信號調節激5抗體 規格: 0.1ml

phospho-IRS-2(Ser731)  磷酸化胰島素受體底物2抗體 規格: 0.1ml

1瓶 5637細胞株 5637 低溫運輸和保存

麥康凱液體培養基（顆粒）  250g

5次 TdT加尾法DNA標記試劑盒 TdT-Tailing DNA Labeling Kit Series -20℃保存

2 ug pCAMBIA1381Z pCAMBIA1381Z 低溫運輸，-20℃保存

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）顆粒 Potato Dextrose Agar 300ml/袋*10

25Inh.U α2巨球蛋白 α2-Macroglobulin -20℃保存

2 ug pIRES2-DsRed-Express pIRES2-DsRed-Express 低溫運輸，-20℃保存

沙氏BHI瓊脂 Sabouraud BHI Agar 250g

100U Red-Pfu DNA聚合  

50次 真菌DNAout Fungal DNAOUT 常溫