實驗操作步驟：  

a．采用認可的方案處死嚙齒動物。

b．立即在無菌超凈臺內用70％乙醇擦洗整個動物。

c．用無菌的鑷子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用無菌鑷子將皮膚扯向后腿。

d．用另一無菌的剪刀和鑷子切開腹部，取出含有胚胎的子宮，置于無菌的培養皿上。

e．剔除胚胎周圍的包膜，將胚胎放于無菌的含有無菌PBS的100ml燒杯中。

f．漂洗胚胎，去掉PBS。繼續用PBS漂洗胚胎直至清洗液清亮為止。

產品屬性：

產品介紹：

名稱    小鼠視網膜Muller細胞

2.組織來源：視網膜組織

3.產品規格：5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

小鼠視網膜Muller細胞分離自視網膜組織；視網膜居于眼球壁的內層，是一層透明的薄膜。視網膜由色素上皮層和視網膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連，由色素上皮細胞組成，它們具有支持和營養光感受器細胞、遮光、散熱以及再生和修復等作用。組織學上視網膜分為10層，由外向內分別為：色素上皮層、視錐、視桿細胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內顆粒層、內叢狀層、神經節細胞層、神經纖維層、內界膜。視網膜內層為襯于血管膜內面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側有一視神經乳頭。視網膜上的感覺層是由三個神經元組成。第一神經元是視細胞層，專司感光，它包括錐細胞和桿細胞。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網膜上，而視錐細胞則在中心凹處最多。第二層叫雙節細胞，約有10到數百個視細胞通過雙節細胞與一個神經節細胞相聯系，負責聯絡作用。第三層叫節細胞層，專管傳導。視網膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網膜感受器沖動的神經纖維跨越視網膜表面，經由視神經到達出口。視網膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區，其分辨能力*。視網膜Muller細胞作為視網膜中的主要膠質細胞，大約占視網膜膠質細胞的90%，因而在視網膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關注。在超微結構水平上，Muller細胞的胞質似乎比臨近的其他細胞更高的電子密度，更發達的內質網，細胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位，Muller細胞形態也會有所差異的。視網膜Muller細胞是一種特化的神經膠質細胞，不僅具有維持視網膜的正常結構和功能的作用，并調制視網膜神經元活動，還能參與多種病理過程，尤其是眼底增殖性病變，如增生性玻璃體視網膜病變、增生性糖尿病視網膜病變等，體外培養Muller細胞是研究這些增殖性病變途徑之一。

5.方法簡介：

()實驗室分離的小鼠視網膜Muller細胞采用膠原酶消化法和反復消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測：

()實驗室分離的小鼠視網膜Muller細胞經GFAP免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息：

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

產品貨號CM-M117

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態梭形、多角形

傳代特性可傳3代左右

消化液0.25%

培養條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

處理方法：

收到細胞后，檢查外包裝是否完整，細胞培養瓶是否完好。如有破損漏液等問題，請即時聯系。并進行以下操作：

1. 75%酒精棉球擦拭T25細胞培養瓶外部。

2. 將細胞放入37度培養箱中預溫3-4小時后再做處理，以穩定細胞狀態。

3. 預熱培養基（含10%胎牛血清，1%雙抗）。

4. 顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數拍照保存（40×,100×,200×各一張）。

5. ①若細胞密度較小，無菌操作，去掉培養基。每瓶添加第四步中準備的5-6ml培養基。放到37度培養箱培養。待細胞密度達到80%以上，進行傳代。

注意事項：

1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預實驗，以優化實驗條件，取得最佳實驗效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內壁上的液體離心至管底，

避免開蓋時試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗

并*清除殘留清潔劑。

6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應按照規定程序處理。

細胞培養的優點：

1.研究的對象是活細胞

在實驗過程中，根據要求可始終保持細胞活力，并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態、結構、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細胞培養一定代數后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。

4.研究內容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備

記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。

5.研究的范圍比較廣泛

應用的學科領域較為寬廣，如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等；

適用的對象范圍廣，從低等動物到高等動物，一種動物的不同年齡階段以及不同組織，都可進行有針對性的研究。

6.研究的費用相對較經濟

可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。

500mL Mac Ewen Solution  Mac Ewen Solution  常溫保存 0.156-10 ng/mL 人泛素激活(NEDD8-activating enzyme E1 catalytic subunit)ELISA試劑盒

50次 SP6體外轉錄試劑盒 SP6 in vitro Transcription Kit -20℃保存 0.156-10 ng/mL 1型脊髓灰質炎病毒(PV-1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)

2 ug pLVX-DsRed-Monomer-N1 pL

小鼠視網膜Muller細胞100次 植物種屬鑒定PCR Mix 9（質體 trnH-psbA） Plant DNA Barcoding PCR Mix -20℃保存

2 ug pDsRed-Monomer-Golgi pDsRed-Monomer-Golgi 低溫運輸，-20℃保存

葡萄糖半固體  20支

250mL Beta-ME-EDTA Solution（beta-EDTA溶液）  Beta-ME-EDTA Solution  常溫保存

Mouse Anti-Bov IgG/HRP  辣根過氧化物標記的小鼠抗牛IgG 規格: 0.1ml

SM Myosin (Smooth Muscle)  人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠單抗 規格: 0.2ml

KLK1  激肽釋放1抗體 規格: 0.1ml

TGFβ1  轉化生因子β1抗體 規格: 0.1ml

KIAA1576/VAT1L  囊泡胺轉運蛋白1家族蛋白抗體 規格: 0.2ml

PCDHAC2  原鈣粘蛋白介導的PCDHαC2受體抗體 規格: 0.2ml

UBE2V1/UEV1A  泛素結合E2變異體1抗體 規格: 0.2mlGRM3  促代謝型受體M3抗體 規格: 0.2ml

FSIP1  纖維性鞘結合蛋白1抗體 規格: 0.2mlKIF11/Eg5/TRIP5  驅動蛋白樣蛋白1抗體（甲狀激素受體相互作用蛋白5） 規格: 0.2ml