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T4 DNA 連接酶

參  考  價:312
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35KU 312元 15盒可售

更新時間:2023-11-06 15:02:07瀏覽次數:969次

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貨號 A-PJ1087 分類 克隆相關
規格 35KU 品牌 撫生
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產品介紹:

T4 DNA 連接酶

描述:T4 DNA Ligase 可催化相鄰 DNA 鏈的 5’-P 末端和 3’-OH 末端以磷酸二酯鍵結合的反應,需 ATP 作輔酶,不僅 可以催化粘性末端之間或平滑末端之間的 DNA 的連接,也 可以催化 DNA 與 RNA 之間以及少數 RNA 之間的連接。可 應用于在粘性末端或平末端連接雙鏈 DNA 分子,也可應用 于修補雙鏈 DNA、RNA 或 DNA RNA 雜交體上的缺口。

組分

儲存:-20°C 可保存 2 年。
活性定義:16°C 反應 30 分鐘條件下,使 1pmol 的粘性末端
DNA 連接所需要的酶量定義為 1Unit。
失活:65°C,10 分鐘。
10×T4 Ligase Buffer:500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mMMgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法
1. 按以下組分配制反應體系
10×T4 Ligase Buffer 2 μl
載體 50 ng(0.2-1pmol)
插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol)
T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意:兩個片段的連接時,通常載體與插入片段的摩爾比為1:3(但該比例并非絕對嚴謹,在 1:1-1:10 范圍內均可獲得理想的實驗結果),提取根據片段大小與濃度,計算其摩爾濃度。
2. 如為粘末端連接反應, 22°C (16-37°C)連接 30min,連接產物直接用于轉化(或凍存于-20°C)。



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