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細胞適應無血清培養基的方法

時間:2025/4/14閱讀:164
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細胞適應無血清培養基的方法:

1.直接適應——細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中。

 一些類型細胞可直接從包含血清的培養基適應無血清培養基。對于直接適應,接種細胞密度應該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時,傳代培養細胞。當細胞密度在培養47天后達到2×106~4×106細胞/ml時,細胞全適應了無血清培養基。每隔3~5天,當細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

2.連續適應——分好幾步把細胞從添加血清的培養基轉換到無血清培養基(SFM)中,與直接適應相比較,連續適應趨向對于細胞更加溫和一些。

    1)以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養物到75%有血清培養基:25SFM混合培養基中,傳代培養細胞適應無血清培養基的方法。

  2)當細胞密度>5×105細胞/ml時,以2×1053×105細胞/ml細胞密度,在有血清培養基:SFM5050的混合培養基中傳代培養。

  3)以2×1063×106細胞/ml細胞密度,25%有血清培養基和75%SFM中傳代培養。

  4)當細胞密度達到1×1063×106細胞/ml(接種后46天),在100SFM培養基中傳代培養。

  5)每隔35天,當細胞密度達到1×1063×106細胞/ml,細胞活率在90%時,貯備的適應了無血清培養基的細胞培養物應該再次傳代培養。

   建議備份前一次混合培養的培養物,直到每一次細胞適應了新的混合培養基。每一次減少血清前,可能需要在SFM/有血清混合培養基中進行幾次傳代。

  在適應過程中,不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意,與有血清培養基相比,大部分SFM包含非常少的蛋白質,因而更易于受外界因素的影響。


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