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二抗的選擇指導

時間:2024/5/20閱讀:329
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       二抗是在其它宿主體內制備的能與一抗或一抗片段結合的抗體,上通常連有酶或熒光素等標簽。由于二抗所具備的優點使得其在免疫學實驗中得以廣泛應用,如WB/ELISA/IHC/IP等。二抗針對某一特定物種的所有抗體均具有特異性,因而使用特定標記的二抗可以免去對每一個一抗進行標記,大大節省了時間和費用;此外,一個一抗分子可以同時結合幾個二抗分子,從而使信號大大增強,提高了實驗靈敏度。

二抗,廣義上是指專門和一抗進行特異性反應和結合的抗體。檢測任何目的靶蛋白都有不止一種抗體可供選擇,在選擇二抗的時候要綜合考慮一抗的類型及后繼檢測方案的要求,一般來說,選擇合適的二抗需要從以下幾個方面考慮:

1.一抗的種屬來源

根據一抗的物種來源選擇相應的抗該物種的二抗。例如:一抗是小鼠源的單克抗體,二抗則選抗小鼠的二抗(山羊抗小鼠或兔抗小鼠等)。

2.一抗的類別亞型

二抗需與一抗的類別或亞類相匹配。這通常是針對單克隆抗體而言。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白,因此相應的二抗就是抗IgG抗體。單克隆抗體的類別及亞型通常會在產品說明書中有描述,如果一抗是小鼠IgM,那么相應的二抗就應當是抗IgM。如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞型(IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3),那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結合,或者你也可以選擇專門針對這一亞型的二抗。此種抗體在雙標記實驗中尤其合適。

3.二抗的藕聯標記

一般來講,藕聯到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP)、熒光基團、金顆粒。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗。WB和ELISA常用的二抗是酶標二抗,而免疫熒光實驗中通常使用熒光基團標記的二抗,而金顆粒標記的二抗則更多的應用于免疫電鏡中。

寫在最后:抗體廣泛應用于各種科研領域,且價格不菲。謹慎選擇質量可靠,適用的抗體能夠有效避免科研時間及成本的浪費,不要因為貪圖便宜,選擇了一些“平價替代"產品,其質量及售后,無法有效保證。


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