ELISA試劑盒操作問(wèn)題

1.一次ELISA實(shí)驗(yàn)需要多長(zhǎng)時(shí)間？

雙抗體夾心ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要3.5-4小時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)ELISA法一次實(shí)驗(yàn)需要2-2.5小時(shí)。

2.血清樣本如何處理？

全血標(biāo)本于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

3. 血漿樣本如何處理？

建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，于1000×g離心15分鐘，仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

4.細(xì)胞上清液樣本如何處理？

檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（1000×g）。仔細(xì)收集上清。

5.細(xì)胞裂解液樣本如何處理？

檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或者超聲破碎，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右（5000×g）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

6.組織樣本如何處理？

用預(yù)冷的PSB （0.01M,pH=7.4）沖洗組織，以去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱(chēng)重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣本對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。

7.為什么有的試劑盒是采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法？

小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法。其原理是標(biāo)本中的抗原和固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)生物素化抗體上的結(jié)合位點(diǎn)，標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的生物素化抗體愈少，*后的顯色也愈淺，即顯色深淺與樣本中的抗原濃度成反比。小分子激素等ELISA測(cè)定多用此法。

8.用什么軟件處理ELISA檢測(cè)的數(shù)據(jù)比較好？

ELISA標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合可以應(yīng)用Curve Expert軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。它使用非常方便，可以生成漂亮的曲線應(yīng)用到論文之中。軟件可以在下載中心進(jìn)行下載。

9. 試劑盒做的結(jié)果不理想怎么辦？

實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想請(qǐng)及時(shí)與客服或技術(shù)支持聯(lián)xi，我們可以幫您一起分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果僅憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測(cè)。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問(wèn)題，可以為您退換貨；如果是實(shí)驗(yàn)操作的問(wèn)題，技術(shù)人員可以給您一些改進(jìn)的建議。