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技術文章

ELISA試劑盒檢查系統

閱讀:340發布時間:2016-11-15

ELISA試劑盒操作過程
①兔抗人IgG 作為抗原,用包被液l:8000稀釋,100μL/孔參加聚苯乙烯96孔反響板中。4℃放置過夜。
②洗刷:次日傾去凹孔內的液體,洗刷液洗3次。
③封閉:加l00μL/孔封閉液,室溫放置0.5h.
④洗刷:用洗刷液洗3次。
⑤加待測樣品(一抗):將含單克降抗體的細胞培養上清在另-塊板上用PBS 連續稀釋(依照1:2或1:10),100μL /孔加到 已包被的板上,每個樣品平行做兩份,PBS或空白培養基作為陰性對照。
ELISA試劑盒已知樣品作為陽性對照。加蓋37℃恒溫箱溫育 1~2h。
⑥洗刷:用洗刷液洗3次。
⑦加酶標抗抗體:兔抗鼠IgG-HRP,用封閉液l :8000稀釋,100μL/孔,加蓋37℃恒溫箱溫育1h。
⑧洗刷:用洗刷液洗5次,蒸餾水洗2次。
⑨顯色:加新鮮制造的底物溶液100μL/孔,室溫暗處放置5~30min,顯現藍色。
⑩停止反響、比色:加50μL/孔停止液。色彩變黃;ELISA試劑盒用酶標儀測定450nm 處各孔的吸光值,陽性反響的zui大稀釋度為待測樣品的效價。
自個也為此煩惱過很長一段時間,跟著自個技術水平得前進,或多或少地也把握了ELISA體系的脾氣,也是游刃有余吧,如今做方陣,ELISA試劑盒已是輕車熟路了,曾經檢查一種抗體用整整一下戰書還算得暈暈的,如今給我十個八個的從包被到顯色,一個工作日根本搞定。
ELISA試劑盒檢查系統可謂是免疫學反響應用到科研出產中zui為靈敏的技術手段。


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