在加熱滅菌前，成分應邊攪拌邊溶解于水中。高壓滅菌的時間取決于培養基中微生物的含量，容器的大小，每個容器中物質的體積和滅菌鍋內容器的空間。

    在制備時，由于污染的微生物的含量通常很低，所以影響高壓時間的主要變量取決于上述其他的幾個因素。滅菌時間通常要在121℃下保持15~20min，這個時間從中心溫度達到121℃開始計算。可以將熱電偶放人滅菌鍋內部中心進行測定。

    lOOmL的瓶子或燒杯單獨放在髙壓鍋中達到121℃大約需要10min，如果多個瓶子緊挨著放滿滅菌鍋內的絲懸筐中，瓶子中的物質需要 20min才能達到121℃如果培養基或稀釋液的體積很大時，則需要更長的時間；例如單獨使用1L的瓶子溫度達到121℃時需要20min,如果許多這樣的瓶子緊挨著放滿滅菌鍋內的絲懸筐中，則中心溫度要達到121℃需要30mm或更長的時間。為了達到滅菌的目的，它和稀釋液進行高壓滅菌時，惟一正確的方法是將熱電偶放入滅菌鍋中測定。

    分裝在大的容器中時，可能會因為延長滅菌加熱時間而造成 熱降解。因此在高壓滅菌前，先將培養基成分溶解后分裝到較小的容器中。

    由于配制的原料不同，使用要求不同，而貯存保管方面也稍有不同。一般在受熱、吸潮后，易被細菌污染或分解變質，因此一般培養基必須防潮、避光、陰涼處保存。一些需嚴格滅菌的需要較長時間的貯存，必須放在2~6℃的冰箱內。

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