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如何預防細胞培養(yǎng)的污染問題

時間:2015/7/9閱讀:228
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    體外培養(yǎng)的細胞受到嚴重污染時,有時即使想盡各種辦法也難以挽回。因此,防止污染,預防是關(guān)鍵。只有將預防措施貫穿于整個細胞培養(yǎng)的始終,才能將發(fā)生污染的可能性降到zui小程度。一般預防可從以下幾方面著手:

    1、從物品、用品消毒滅菌著手
 
  細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*,各種溶液滅菌除菌要仔細,并在取樣檢菌一周后確認無菌才能使用。同時,在無菌過濾操作中,隨著濾過體積的增大,濾膜破損的可能性增加,故應選擇zui后過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養(yǎng)箱進行消毒。具體操作:75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后,使用可移動的紫外燈至少消毒30min,加入高壓滅菌過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml的飽和硫酸銅加3L滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。

    2、添加抗生素

    各種抗生素性質(zhì)不同,對各種微生物的作用也不同,聯(lián)合應用比單用效果好,預防性應用比污染后使用好。但反復使用抗生素會使微生物產(chǎn)生耐藥性,且對細胞本身也有一定影響,因此為避免誘導抗藥細菌,應定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素,或盡可能不用抗生素處理。

    3、從操作者做起
 
    (1)進無菌室前要*洗手,按規(guī)定穿*。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

    (2)操作者動作要輕,安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意,金屬器械不能在火焰中長時間燒灼,以防退火;燒過的器械要冷卻后才能使用;已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼,因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì),吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中;膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長,以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體,危害培養(yǎng)細胞,同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。

    (3)操作時盡量不要談話,咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。  

    (4)使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶,開瓶后的培養(yǎng)液應保持斜位,避免直立,以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應立即封閉瓶口,培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。

    (5)操作完畢后應整理好工作臺面,用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面。

    (6 吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時,應專管,一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應棄去,以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。

    4、防止細胞交叉污染
 
  所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備,一旦懷疑發(fā)生交叉污染,可做細胞遺傳學方面的鑒定,如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變,可以復蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系(株)的傳代工作應由兩人獨立進行。

    5、無菌室的*消毒

  1 新潔爾滅全面*擦洗無菌室。使用前應稀釋即配即用。新潔爾滅和酒精相比,zui大的優(yōu)點是便宜,因為新潔爾滅500ml只需5元,而且可以稀釋50倍用,而同樣量的酒精價格可能是新潔爾滅的幾十倍。
  2)甲醛熏蒸法:甲醛是一種廣譜滅菌劑菌,其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉,熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含3740%的甲醛。

    其主要用法為:

    a)熏蒸消毒:每立方米空間甲醛用量為1015毫升,熏蒸消毒時應密閉門窗封閉至少4h以上。*加40%甲醛(11)混合后放入一開發(fā)容器中,立即可見白色甲醛煙霧。消毒后可放入25%氨水蒸發(fā)中和刺激氣味。氨水用量為所用甲醛水溶液的一半,時間為30分鐘。甲醛氣體毒性非常強,所以操作時一定需帶上防毒面具。

    b)自然揮發(fā): 將較大量的甲醛水溶液放入一敞開容器中,室內(nèi)溫度保持在18攝氏度以上,同時室內(nèi)噴水以保持相對濕度在70%以上,經(jīng)16小時可達到室內(nèi)消毒的目的


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