我公司技術專員特意為大家準備十幾條ELISA操作的重點細節，閱讀之后可以總結一下您在實驗中有哪些重點被忽略掉了。熱愛ELISA實驗的新手們需注意這些細節：

1.不管是試劑盒，還是其它產品，在使用之前我們都要仔細閱讀說明書。

2.同樣的，一定要確定試劑盒是不是在有效期內。

3.按說明書確定所有試劑齊全（數量、體積）。

4.標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備（貯存），盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，注意低溫保存。

5.ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。

6.標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。

7.一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標準的elisa操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。

8.根據檢測標本數量確定所需試劑的量。

9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技術指南。

10.選擇抗體時選擇一個單抗和一個多抗進行配對；若選擇兩個單抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。

11.為了優化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。

12.若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

13.當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。

14.準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。

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