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人臍靜脈血管內皮細胞 , HUVEC(原代)細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數細胞研究工作者來說,人臍靜脈血管內皮細胞 , HUVEC(原代)細胞污染那可是個糟糕的事情,也是比較容易出現的情況,我們如何防范,如何避免,是我們要學習和掌握的。
萘啶酮酸 4.5mg*5 添加于225ml HB160中制成LB1
萘啶酮酸 4.0mg*5 添加于200ml HB160中制成LB2
人臍靜脈血管內皮細胞 , HUVEC(原代)細胞吖啶黃素 2.7mg*5 添加于225ml HB160中制成LB1
吖啶黃素 5mg*5 添加于200ml HB160中制成LB2
七葉苷培養基 10 生化試驗培養基,用于細菌七葉苷利用試驗(SN標準)用于動力觀察,菌種保存,H抗原位相變異試驗等(SN標準)
半固體動力培養基 250 用于動力觀察,菌種保存,H抗原位相變異試驗等(SN標準)
半固體動力培養基(袋裝) 100ml*10包 用于動力觀察,菌種保存,H抗原位相變異試驗等(SN標準)下面我們對細胞培養中常見的污染情況,做個總結:
1)原蟲:培養液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細小的點狀物數量非常多,輕微活動,細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢,而且細胞狀態不好,邊緣不清楚,細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養。這種共生是非常普遍的,但他們的數量小,細胞站優勢所以不會影響到細胞的正常生長,只有當他們到達一定的數量時就會影響到細胞的生長,zui終形成惡性循環。
2)霉菌:培養液是清亮的,倒置顯微鏡下無雜質,37度孵箱培養2-3天,仍清亮,但出現絮狀雜質,鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物,可看到明顯的菌絲,細胞仍可生長,但時間長之后,細胞的活力狀態變差,用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內,再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后,可把所有細胞暫時轉移,采用過氧乙酸擦洗孵箱(包括隔板,箱壁)。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時,使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后,再移入細胞。孵箱應定期清潔(2月左右),尤其在多雨的季節。其它培養箱清洗方法是:用84液擦洗-清水擦洗-75%酒精擦洗-紫外燈照。預防霉菌污染,可在培養基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗;但細胞一旦污染,很難挽救,*或*或雙抗都于事無補,建議舍棄該污染細胞。,將環境*消毒,如果所有細胞都污染,可能是系統污染,檢查一下培養基和器材,如果只是個別污染,可能是操作問題,就要注意操作。
3)細菌:細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀,根據感染細菌的不同,可有不同的外形,培養液一般會渾濁變黃,對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況,是否在高壓滅菌時放氣時間足夠,壓力足夠!尤其是和儲存培養液接觸的移液管等物品,連續兩次污染的話有可能造成儲存液污染,一定要注意!下次使用前檢查一下培養液是否存在渾濁的現象! 可在培養液中加相應的抗生素處理
4)黑蛟蟲:可以穿透濾膜,也可以通過空氣傳播,低倍下為黑色點狀,高倍下可看見黑色的小蟲游來游去,培養液也是不渾的,一般不會太影響,細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態良好,且觀測到的運動物無明顯增多,且培養液顏色、透明度無明顯變化,可在同一批號的血清養的細胞中發現類似現象。對細胞生長狀態不會有明顯影響,在細胞增殖旺盛之后會自然消失,除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話,可以增加細胞的種板密度,以提高細胞的生存率。
5)真菌:一般培養液清亮,不變色,鏡下有絲狀物,有些真菌開始很像死細胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,象珊瑚狀,不象細胞碎片分不清,慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢,不象細菌那么容易被發現,但是一旦發現有它的存在細胞就被污染了,也很難救活了。
6)支原體:黑色的,好象多為多形,培養液一般培養液一般會渾濁,原體感染,國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后,細胞病變不很明顯,只是慢慢死去。用泰樂菌素,獸用支原體病的藥,但可用于細胞培養,無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養液培養6天或連續傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因:可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環境問題等等關于培養基的無菌狀況,取培養基至培養瓶中(不加細胞),37度試培養一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養基中事先加入雙抗(*和氨芐*)。但雙抗有時會影響細胞的狀態,所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗,以避免影響實驗結果。1、孵箱應定期用三氧機消毒或者 紫外光照射,并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養液\培養瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大,風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經甲醛熏蒸消毒后,可用同等量的氨水噴灑中和,約幾小時即可進入操作。
BPLS瓊脂 250g 用于各種標本中沙門氏菌選擇性分離培養(Merck方法)
改良BPLS瓊脂 250g 用于各種標本中沙門氏菌選擇性分離培養(ISO標準)
MIO培養基 250g 用于動力、吲哚和*試驗(FDA方法)
XLT4瓊脂 250g 用于食品中致病菌,特別是沙門氏菌分離培養(Merck方法)
D/E中和肉湯 250g 用于衛生環境中微生物的分離培養(ACUMEDIA方法)
D/E中和瓊脂 250g 用于衛生環境中微生物的分離培養(ACUMEDIA方法)
M-肉湯 250g 用于干燥食品和種子中沙門氏菌增菌培養(MERCK方法)
煌綠瓊脂 250g 用于沙門氏的分離培養(Acumedia方法)
煌綠黃胺嘧啶瓊脂 250g 用于沙門氏的分離培養(Acumedia方法)
BGS瓊脂 250g 用于沙門氏的分離培養(USDA-FSIS方法)
胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯(TSB-YE) 250 用于單增李氏菌增菌肉湯(EB)的配制(SN、GB標準)
萘啶酮酸 10mg/支*5 用1ml無菌水溶解后添于225ml HB150中(SN、GB標準)
吖啶黃素 3.75mg/支*5 用1ml無菌水溶解后添于225ml HB150中(SN、GB標準)
放線菌酮 11.25mg/支*5 用1ml無菌水溶解后添于225ml HB150中(GB標準)
胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂(TSA-YE) 250 用于單增李氏菌的分純,培養,可用于做7%羊血瓊脂(SN標準)
李氏菌選擇性培養基基礎(MMA) 250 用于單增李氏菌選擇性分離(SN標準)
* 3mg/支*5 用1ml無菌水溶解后添加 100ml HB155
糖發酵基礎肉湯 250 適用于微生物檢驗中各種糖發酵實驗,無菌加入各種糖醇類物質(SN標準)
李氏菌增菌肉湯(LB1,LB2)基礎 250 添加奈啶酮酸,吖啶黃素,即為LB1,LB2,用于李氏菌二步增菌(GB標準)
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