ELISA試劑盒基礎知識培訓

時間：2014-8-16閱讀：272

大家在做ELISA試劑盒實驗的過程中，難免會遇到各種不同的問題，比如標準曲線不好，試劑盒的回收率，假陰性，假陽性，實驗的重復性不好等等。現在專業人士就來一一解答用戶們在實驗過程中遇到的各種疑問！
曲線問題：
1.OD值不正常
試劑盒未回溫，試劑盒回溫到25℃
溫度控制不好，控制正確溫度
孵育時間不準確，控制孵育時間
洗滌時沖擊力太大、浸泡時間過長、洗滌次數增加，洗滌4-5次，每孔250ul，然后拍干
陽光直射，對著風直接吹，避風避
酶標儀的波長錯誤，酶標儀的波長450nm
抗體的稀釋錯誤，正確的稀釋抗體
水質問題，用娃哈哈礦泉水代替
2.白板
洗滌液配制錯誤，正確的配制洗滌液
少加液體（錯加液體），正確的步驟加液體
3.無梯度
標準品也污染，換標準品點板
OD值不正常，控制溫度時間在做一次
人為點板，不要點板
4.線性不好
OD值不正常，控制溫度時間在做一次
回收率
1.空白管陽性高
樣本本身就是陽性樣本，換陰性樣本做回收率
空白管在實驗中被污染，實驗中防止交叉污染
水質原因用，娃哈哈礦泉水代替
2.偏高
添加量不準確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量多，準確的取液吹干
取到其它相層液體，取需用相吹干
復溶液未稀釋或加入量少，正確的稀釋復溶液
3.偏低
添加量不準確，的添加量
添加濃度不適合，添加合適的濃度
取液吹干量少，準確的取液吹干
復溶液稀釋錯誤或加入量多，正確的稀釋復溶液
假陰、陽性
1，水質原因：點復溶液驗證，用娃哈哈礦泉水代替
2，實驗操作原因
吸取到其它相吹干，準確的取液吹干
離心不*，延長離心時間
樣本的污染，更換樣本
乳化未處理*，溫浴（70℃）處理乳化現象
3，儀器試劑原因
離心管未清洗干凈，正確的洗滌器具
有機溶劑的影響，做試劑空白看影響結果
4，衍生化試劑原因（長時間衍生化試劑變質）,更換衍生化試劑
5，與曲線好壞相關,，保證曲線的正常。

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