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小鼠尿微量白蛋白(alb)elisa試劑盒制作方法

時間:2015/2/3閱讀:856
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小鼠尿微量白蛋白(alb)elisa試劑盒操作步驟
1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上按序設標準品孔10孔,在*、第二孔中分別加標準品100μl,然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻;再各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后,在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉;再各取50μl分別加到第五、第六孔中;再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中;再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中;再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。( 稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃 度分別為 150 ug/ml,100 ug/ml ,50 ug/ml,25 ug/ml,12.5 ug/ml)。
2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,輕輕晃動混勻。
3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 
7.         溫育:操作同3。
8.         洗滌:操作同5。
9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算
  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。 
小鼠尿微量白蛋白(alb)elisa試劑盒注意事項
1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。
3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。
4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔OD值的),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
5. 嚴格按說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
6.本試劑不同批號組分不得混用。
7.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9.底物請避光保存。
檢測范圍:
4 ug/ml -200 ug/ml
規格:
96人份/盒
小鼠尿微量白蛋白(alb)elisa試劑盒保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月

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