沙眼衣原體有3個(gè)生物學(xué)變種,其中2個(gè)與人類疾病有關(guān),引起沙眼及包涵體結(jié)膜炎。沙眼是世界范圍流行的眼病,是致盲的重要原因。此外,沙眼衣原體、人型支原體、解脲脲原體是引起人類泌尿生殖系統(tǒng)感染的重要病原體,尤以沙眼衣原體更重要。常用檢查方法有ELISA試劑盒和生物芯片法檢測(cè)沙眼衣原體抗體。
方法學(xué)原理:在已包被沙眼衣原體抗原的微孔板孑L內(nèi),加入待測(cè)血清和HRP-抗人Ig,再加入酶底物顯色。根據(jù)顯色強(qiáng)度可判定沙眼衣原體抗體的有無及水平。
[試劑]
1.預(yù)包被微孔板
2.洗滌液
3.HRP-抗人IgG
4.陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照
5.底物液
6.終止液
[儀器] 酶標(biāo)儀或全自動(dòng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。
[ELISA試劑盒檢測(cè)步驟]
1.從試劑盒中取出已包被沙眼衣原體抗原的微孔板和所有試劑,預(yù)溫至室溫。
2.將待檢血清、校準(zhǔn)血清、陰性和陽(yáng)性質(zhì)控血清用稀釋液作1:20稀釋。分別加至相應(yīng)的微孔內(nèi),每孔100u1。空白孔加稀釋劑100ul。
3.室溫環(huán)境中溫育20min后用洗滌液洗3次,每次洗滌量250ul。
4.各孔分別加HRP-抗人IgGl00~1,室溫環(huán)境中溫育20min,同上法洗滌3次。
5.各孔加底物溶液100rtl,室溫環(huán)境中溫育10min顯色,每孔加終止液100gl終止反應(yīng)。
6.在酶聯(lián)免疫測(cè)定儀上測(cè)定450nm波長(zhǎng)的吸光度。
[結(jié)果判斷]
1.將吸光度用下列公式換算成ISR值:
ISR=樣品的吸光度÷(校準(zhǔn)物的平均吸光度×校正因子)
(校正因子在校準(zhǔn)血清的標(biāo)簽上)
2.待測(cè)血清ISR值≤0.9為陰性。
3.待測(cè)血清ISR值為0.91一1. 09為可疑陽(yáng)性,應(yīng)重新檢測(cè)或隨診。
4.待測(cè)血清ISR值≥1.10為陽(yáng)性。
[注意事項(xiàng)]
1.每次試驗(yàn)均須設(shè)置陽(yáng)性與陰性質(zhì)控血清和校準(zhǔn)血清測(cè)定孔。
2.用450nm波長(zhǎng),試劑空白的吸光度必須<0.15;陰性質(zhì)控血清的吸光度必須<0.25;陽(yáng)性質(zhì)控血清的吸光度必須≥0.50;校準(zhǔn)血清的吸光度必須≥0.25。
[ELISA試劑盒正常參考值] 沙眼衣原體抗體陰性。