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色譜柱注意事項

時間:2013/9/22閱讀:816
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流動相: a、溶劑必須是HPLC級的,試劑則盡可能使用高純度的; b、不與固定相發生化學反應,粘度小,且對樣品有適宜的溶解度,要求 k 在1~10范圍內(可用范圍)或2~5(*范圍),k 值太小,不利于分離;k 值太大,可能使樣品在流動相中沉淀; c 、 流動相使用之前必須過濾和脫氣; d、確保溶劑間是相互混溶的; e、流動相必須與檢測器相匹配,如用紫外檢測器時,不能選用截止波長大于檢測波長的溶劑。 痕量的雜質會極大地降低色譜柱的性能,當需要更換流動相時,確保溶劑(緩沖液)之間是相互混溶的。若使用的溶劑與色譜柱中的溶劑不能混溶,則需使用過渡溶劑,否則會對色譜柱產生*性的傷害。鹽或緩沖液從流動相中析出也會對色譜柱產生*性的傷害。每次進樣前應該檢查樣品在流動相中的溶解性,如果可能盡量使用流動相溶解樣品。 ②、固定相: a、流動相的pH值應保持在2.0-8.0之間(除非有特殊說明); b、如果有必要可使用預飽和柱和保護柱; c、使用氨基柱時,流動相和樣品中盡量避免含醛類和酮類物質。 當前的反相色譜柱填料可分為以下三種: ⒈硅膠柱:柱效高,機械強度大,但對pH敏感,低pH值(<2.0)會使鍵合相水解(除去鍵合的功能集團);高pH值(>8.0),硅膠溶解。如果流動相的pH值接近2.0或8.0,需要使用預飽和柱。 ⒉有機聚合物填料:在寬pH范圍內穩定,殘留硅羥基效應較小;但其柱效低,機械強度不高,在不同的溶劑中可能縮水或溶脹。在應用過程中,壓力不能超過其zui大能承受的限制,且流動相中有機溶劑如甲醇、異丙醇、乙醇的含量不能超過10%。 ⒊有機-無機雜化粒填料:新開發的一種新型填料,由兩種高純的單體(有機聚合物和無機硅烷)合成的高純度填料,此類填料將硅膠填料和有機聚合物填料的優點有機地結合起來,柱效高、機械強度高、穩定性好、pH范圍寬,特別是表面和顆粒內部的硅羥基大部分被有效的屏蔽,使其對堿性物質的保留性能非常好。 ③、背壓(backpressure)和流速: a、保持背壓低于3500psi(245bar); b、避免任何突然的壓力變化; c、如果背壓高(>3500psi),可反沖色譜柱,但流速應為正常流速的1/5-1/2; d、如果檢測池需要除氣,可以使用背壓調控器(backpressure regulator)。 為zui大限度的延長色譜柱的壽命,可根據色譜柱的填料的粒徑、色譜柱的內徑對流速進行調整,使得背壓<3500psi。如果背壓不超過界限,色譜柱的流速可任意設定

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