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酶聯免疫吸附測定法簡介及原理

時間:2013-5-7閱讀:512
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酶聯免疫吸附測定法簡介及原理
酶聯免疫吸附測定法(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay),簡稱ELISA,是實驗室zui常用的檢測方法。酶是能夠催化化學反應的特殊蛋白質,其催化效力超過目前所有人造催化劑。ELISA是將酶催化的放大作用與特異性抗原抗體反應結合起來的一種微量分析技術。酶標記抗原或抗體以后,既不影響抗原抗體反應的特異性,也不改變酶本身的活性。因此ELISA具有準確性高、檢測時間短、價格低廉、判斷結果有客觀標準、結果便于記錄和保存等優點,適合于大批標本的檢測,廣泛應用于食品安全檢測、醫療檢測以及免疫實驗分析等領域。  
酶聯免疫吸附測定法(ELISA)原理:
1)抗原或抗體能吸附于固相載體表面,并保持其免疫學活性;
2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性;
3)酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,可根據已知濃度的抗原或抗體的顏色反應的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。在ELISA中酶起到很關鍵的作用,常用于ELISA法的酶有辣根過氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過氧化物酶為多。酶結合物是酶與抗體或抗原, 半抗原在交聯劑作用下聯結的產物,它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應,還能催化酶促反應,顯示出生物放大作用。

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