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上海勁馬何經(jīng)理分享elisa試劑盒空白值過(guò)高的問(wèn)題

時(shí)間:2013/9/23閱讀:1956
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公司何為解決老師在實(shí)驗(yàn)中碰到的elisa試劑盒空白值過(guò)高的問(wèn)題,特意親臨實(shí)驗(yàn)室給我們講解,何說(shuō):“ELISA實(shí)驗(yàn)的原理似乎很簡(jiǎn)單,不外乎固定抗原,添加一抗、二抗和底物,間中夾雜著洗滌和封閉。但是,即使是平淡無(wú)奇的洗滌和封閉,如果實(shí)驗(yàn)過(guò)程中做得不仔細(xì),也有可能毀了整個(gè)實(shí)驗(yàn)。下面是在實(shí)驗(yàn)中會(huì)影響到elisa試劑盒空白值過(guò)高的因素。”
①洗滌
洗滌步驟看似很無(wú)聊,其實(shí)很重要,因?yàn)槿绻唇Y(jié)合的材料(如非特異結(jié)合的抗體或檢測(cè)試劑)殘留在微孔板中,那么它會(huì)增加背景噪音。如有必要,可增加洗滌液中的鹽濃度,這會(huì)阻止非特異結(jié)合反應(yīng)。如果背景過(guò)高,而您懷疑洗滌不夠時(shí),可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
②封閉
封閉液的作用是讓不相關(guān)的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這就降低了可產(chǎn)生信號(hào)的抗體非特異結(jié)合的機(jī)會(huì)。您當(dāng)然也希望抗體只與目的蛋白結(jié)合吧。如果您的背景過(guò)高,懷疑封閉不充分,那么您可以嘗試使用更高濃度的封閉液,或適當(dāng)延長(zhǎng)封閉時(shí)間。
③抗體濃度
我們通常會(huì)按照老師要求的操作步驟做,但是如果試劑稍有不同,則可能需要優(yōu)化抗體的量。記住,非特異的抗體結(jié)合會(huì)增加背景。為了防止這一點(diǎn),切勿使用過(guò)多的一抗或二抗。
④檢測(cè)試劑
另一點(diǎn)也很顯而易見(jiàn):切勿使用過(guò)多的檢測(cè)試劑。如果濃度過(guò)高,或者未正確稀釋?zhuān)瑒t會(huì)導(dǎo)致高背景。也不要顯色過(guò)度,如有必要,優(yōu)化一下何時(shí)應(yīng)加入終止液。
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