蘇州阿爾法生物實(shí)驗(yàn)器材有限公司
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更新時(shí)間:2023-06-19 10:09:53瀏覽次數(shù):78次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來(lái)自 儀表網(wǎng)HyCyt 基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑屬于 二代HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒(shRNAx2.0)是基于海星生物的特異SSR重組酶技術(shù)開(kāi)發(fā)的基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒。產(chǎn)品特點(diǎn):利用SSR(Site-specific Recombinase)重組酶實(shí)現(xiàn)干擾序列DNA載體高效穩(wěn)轉(zhuǎn),其次大幅提升了干擾效率。該轉(zhuǎn)染試劑盒可以取代病毒實(shí)現(xiàn)基因干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建!干擾試劑盒包括了人(Human)和小鼠(Mou......
HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品名稱:HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑
產(chǎn)品貨號(hào):shRNAx2.0
HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑 介紹
該產(chǎn)品屬于二代HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)是基于海星生物的位點(diǎn)特異性SSR 重組酶技術(shù)開(kāi)發(fā)的基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒。
HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒-轉(zhuǎn)染試劑特點(diǎn):
該轉(zhuǎn)染試劑盒利用SSR (Site-specific Recombinase)重組酶實(shí)現(xiàn)干擾序列載體高效穩(wěn)轉(zhuǎn),大幅提升了干擾效率。試劑盒的轉(zhuǎn)染操作與siRNA轉(zhuǎn)染操作一樣,構(gòu)建與病毒一樣的基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,是新型的基因干擾技術(shù)產(chǎn)品。
干擾試劑盒包括了人(Human)和小鼠(Mouse)基因組的所有基因,shRNAx2.0 試劑盒包含2個(gè)優(yōu)選的shRNA干擾序列載體、1個(gè)表達(dá) GFP/對(duì)照shRNA干擾序列載體和1管位點(diǎn)特異性SSR 重組酶,通過(guò)SSR重組酶高效催化shRNA載體整合到細(xì)胞的基因組中,實(shí)現(xiàn)shRNA 片段的細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)效果;同時(shí)由于SSR重組酶整合效率,shRNA片段在目的細(xì)胞基因組大約含有10~100 個(gè)拷貝,高拷貝數(shù)大幅提升了shRNA片段的表達(dá)效果,從而提升了基因的干擾效果。shRNAx2.0載體包含有puro 抗性基因和GFP熒光基因,可以輕松通過(guò)熒光判斷干擾載體的轉(zhuǎn)染效率和目的載體表達(dá)效率,并通過(guò)Puromycin藥物篩選,獲得高表達(dá)的細(xì)胞株,輕松建立基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。
shRNAx2.0干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒的操作與siRNA轉(zhuǎn)染過(guò)程一樣簡(jiǎn)單,對(duì)各種細(xì)胞都有非常好的干擾效果,也適用于間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs )等的基因功能研究。
HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 優(yōu)勢(shì)特點(diǎn)
HyCyte基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 產(chǎn)品組成
| 產(chǎn)品原理
HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)的干擾效率與傳統(tǒng)病毒法干擾效率相當(dāng)。因其SSR重組酶可以構(gòu)建高拷貝“穩(wěn)轉(zhuǎn)"細(xì)胞株,同時(shí)可以通過(guò)藥物篩選到高效、穩(wěn)定的干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株。shRNAx2.0試劑盒是除了病毒法之外可以輕松獲得穩(wěn)定干擾的穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)方案。
使用HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)構(gòu)建干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)株的周期僅1~2周,便可以拿到長(zhǎng)期穩(wěn)定干擾的細(xì)胞株,是大幅提升實(shí)驗(yàn)速度的方案。
| 應(yīng)用流程
HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)操作步驟 (脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法):
本試劑盒可以采用的轉(zhuǎn)染試劑是Lipofectamine® 2000 Reagent (cat#11668-030),具體參照轉(zhuǎn)染試劑每種細(xì)胞情況。不同類型的轉(zhuǎn)染試劑,請(qǐng)按照制造商的操作說(shuō)明進(jìn)行轉(zhuǎn)染。
注意:懸浮細(xì)胞不推薦使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法。
HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)操作步驟(電轉(zhuǎn)化法):
本試劑盒可以Neon轉(zhuǎn)染系統(tǒng),具體參照設(shè)備對(duì)每種細(xì)胞參數(shù)。不同類型的電轉(zhuǎn)設(shè)備,請(qǐng)按照制造商的操作說(shuō)明進(jìn)行優(yōu)化。
注意:懸浮細(xì)胞推薦使用電轉(zhuǎn)化法。
HyCyte™基因干擾穩(wěn)轉(zhuǎn)試劑盒 (shRNAx2.0)配有GFP對(duì)照shRNA載體,可以按照實(shí)際使用的方法和細(xì)胞情況,進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索,建議48小時(shí)后的目的細(xì)胞的GFP的陽(yáng)性率不低于50%, shRNAx2.0試劑盒才能獲得較佳效果。
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