熒光定量 pcr試劑-天根SYBR Green
天根目錄號：FP205
天根試劑盒-FP205特點
1. SuperReal PreMix Plus采用了的雙組分熱啟動DNA聚合酶(化學修飾的HotStar Taq
DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶)，從而構成酶活自動調節系統，配合精心
優化buffer體系，具有高擴增效率，高擴增特異性和寬廣的可信范圍的特點。
2. 本產品Buffer體系平衡了K+和NH4+ 的比例，還特別添加了的H-Bond因子, 能協同調整
反應體系中的氫鍵作用力，使引物模板退火條件更加嚴謹，反應的專一性增強，重復性
更好。
3. SuperReal PreMix Plus中預混有SYBR Green I，PCR反應液配制時，只需加入模板、引
物、滅菌蒸餾水便可進行Real Time PCR反應，操作簡單方便。
4. 本產品附帶ROX Reference Dye，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產生的熒光信號
誤差，方便客戶針對不同型號熒光定量PCR儀時選擇對應濃度使用。
試劑盒原理
本產品采用了雙組分熱啟動DNA聚合酶進行PCR擴增，通過檢測反應進程中
SYBR Green I的熒光強度，達到檢測PCR產物擴增量的目的。
本產品中雙熱啟動酶構成了的酶活自動調節系統。酶活自動調節系統是由化學修飾
的HotStar Taq DNA聚合酶和抗體修飾的Anti Taq DNA聚合酶組成。其中HotStar Taq DNA
聚合酶占絕大部分比例，其聚合酶活性的激活是嚴格依賴于95℃高溫的一個緩釋過程，而
Anti Taq DNA聚合酶則在95℃高溫下激活。經過95℃條件下孵育15 min激活大部分
HotStarTaq DNA聚合酶，進入PCR循環后，每經過一輪95℃條件下變性，即可重新激活一
部分HotStar Taq DNA聚合酶。HotStar Taq DNA聚合酶的酶活緩釋機制使其可以與Anti
Taq DNA聚合酶構成的酶活自動調節系統。PCR反應初期，激活的Anti Taq DNA聚
合酶可以協同已經激活的HotStar Taq DNA聚合酶達到優化酶活狀態，而在整個PCR反應過
程中，每一輪新釋放的HotStart Taq DNA聚合酶活力剛好可以彌補因熱變性所導致的部分酶
活損失。因此，SuperReal PreMix Plus在整個PCR反應過程始終保持優化的DNA聚合酶活
力，配合精心優化Buffer體系，從而可以獲得高擴增效率，高擴增特異性和更加廣泛性的模
板適應性。
注意事項
1． PCR反應的預變性條件必須設定為95℃ 15 min，用以充分激活熱啟動酶。
2．本產品中含有熒光染料SYBR Green I，保存本產品或配制PCR反應液時應避免強光照
射。
3．如果試劑沒有混勻，其反應性能會有所下降。使用時請上下顛倒輕輕混勻，請不要使用
振蕩器進行混勻，盡量避免出現泡沫，并經瞬時離心后使用。
4．引物純度對反應特異性影響很大，建議使用PAGE級別以上純化的引物。
5．引物終濃度為0.3 μM可以在大多數體系中獲得良好的擴增結果。如果需要進一步優化，
可以在 0.2-0.5 μM范圍內調整引物濃度。
6．20 μl反應體系中，基因組DNA或cDNA模板的使用量一般小于100 ng，逆轉錄產物作為
模板時，使用量應不超過PCR體系終體積的20%。
