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了解下熒光分光光度計(jì)的操作和使用

閱讀:1635      發(fā)布時(shí)間:2019-5-28
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   熒光分光光度計(jì)是用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜的一種儀器。其能提供包括激發(fā)光譜、發(fā)射光譜以及熒光強(qiáng)度、量子產(chǎn)率、熒光壽命、熒光偏振等許多物理參數(shù),從各個(gè)角度反映了分子的成鍵和結(jié)構(gòu)情況。通過(guò)對(duì)這些參數(shù)的測(cè)定,不但可以做一般的定量分析,而且還可以推斷分子在各種環(huán)境下的構(gòu)象變化,從而闡明分子結(jié)構(gòu)與功能之間的關(guān)系。熒光分光光度計(jì)的激發(fā)波長(zhǎng)掃描范圍一般是190~650nm,發(fā)射波長(zhǎng)掃描范圍是200~800nm。可用于液體、固體樣品(如凝膠條)的光譜掃描。
 
  一、硬件操作
 
  熒光分光光度計(jì)在使用時(shí),需要注意開(kāi)機(jī)次序,以保護(hù)設(shè)備之間不受影響。熒光分光光度計(jì)開(kāi)機(jī)順序一般為先開(kāi)氙燈,然后開(kāi)儀器主機(jī),后開(kāi)跟儀器連接的計(jì)算機(jī)。如此操作的原因在于穩(wěn)態(tài)氙燈是高壓點(diǎn)亮,為了避免瞬問(wèn)脈沖電流對(duì)周圍設(shè)備造成影響,需要先開(kāi)氙燈,等電流穩(wěn)定后再打開(kāi)周邊的電腦等設(shè)備。關(guān)機(jī)順序則相反。
 
  二、軟件操作
 
  熒光分光光度計(jì)多采用工作曲線法,即以已知量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),按試樣相同方法處理后,配成一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度和空白溶液的相對(duì)熒光強(qiáng)度;扣除空白值后,以熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo),繪制工作曲線;然后將處理后的試樣配成一定濃度的溶液,在同一條件下測(cè)定其相對(duì)熒光強(qiáng)度,扣除空白值后,從工作曲線上求出熒光物質(zhì)的含量。
 
  在用熒光分析法測(cè)定某些會(huì)引起熒光改變的微量物質(zhì)時(shí),常采用差示熒光法,可使熒光強(qiáng)度的讀數(shù)差距拉大,使熒光強(qiáng)度的降低加大,從而提高方法的靈敏度和準(zhǔn)確度。
 

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