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LUMI-JH690河北張家口PCR實(shí)驗(yàn)室潔凈工程

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簡要描述: 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)指以臨床診斷治療為目的,以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù),如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、連接酶鏈反應(yīng)(LCR)、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)(TAS)自主序列復(fù)制系統(tǒng)(3SR)和鏈替代擴(kuò)增(SDA)等。一、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)立在二級以上醫(yī)院。河北張家口PCR實(shí)驗(yàn)室潔凈工程
LUMI-JH690河北張家口PCR實(shí)驗(yàn)室潔凈工程 產(chǎn)品詳情

河北張家口PCR實(shí)驗(yàn)室潔凈工程

臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)指以臨床診斷治療為目的,以擴(kuò)增檢測DNA或RNA為方法的檢測技術(shù),如聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、連接酶鏈反應(yīng)(LCR)、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)(TAS)自主序列復(fù)制系統(tǒng)(3SR)和鏈替代擴(kuò)增(SDA)等。

一、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)立在二級以上醫(yī)院。

二、臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)國家批準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)試劑開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。河北張家口PCR實(shí)驗(yàn)室潔凈工程

三、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心(以下簡稱衛(wèi)生部臨檢中心)和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗(yàn)中心(以下簡稱省臨檢中心)負(fù)責(zé)對所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。

(一)PCR實(shí)驗(yàn)室項(xiàng)目建設(shè)辦理程序

   擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》(見附件)籌建實(shí)驗(yàn)室;籌建完成后,由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗(yàn)收申請。申請時(shí)需提交以下材料:

(一)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證》復(fù)印件;

(二)可行性研究報(bào)告;

 1、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本情況、對臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求以及臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測分析;

 2、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置平面圖;

 3、擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將開展的檢驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料

 4、衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組(以下簡稱專家組),按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》對提出申請的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收。驗(yàn)收完成后,在20日內(nèi)將驗(yàn)收報(bào)告寄送至申請機(jī)構(gòu)。

 5、 經(jīng)專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗(yàn)收報(bào)告送至省級行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級衛(wèi)生行政部門后15日內(nèi)未收到省級衛(wèi)生行政部門不同意的意見,方可開展專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。

 6、未經(jīng)專家組驗(yàn)收合格并報(bào)省級衛(wèi)生行政部門備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。

(三)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則
 1、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
 2、標(biāo)本制備區(qū)
 3、擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
 4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
如使用全自動(dòng)分析儀,區(qū)域可適當(dāng)合并,但各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記,避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行,即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū) —>標(biāo)本制備區(qū)—>擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)—>擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如不同的顏色)。工作人員離開各工作區(qū)域時(shí),不得將工作服帶出。

(四)工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)
一、試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
 1、2-8C和-15C冰箱
 2、混勻器
 3、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)
 4、移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)
 5、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)
 6、工作服和工作鞋
 7、辦公用品
二、 標(biāo)本制備區(qū)
 1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
 2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)
 3、混允器
 4、水浴箱或加熱模塊
 5、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)
 6、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)

 7、超凈工作臺(tái)
 8、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)
 9、工作服和工作鞋
 10、辦公用品
如需處理大分子DNA,應(yīng)具有超聲波水浴儀。
(三) 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
 1、核酸擴(kuò)增儀
 2、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)
 3、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)
 4、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭(帶濾心)
 5、工作服和工作鞋
 6、辦公用品
(四)擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
視檢驗(yàn)方法不同而定。基本儀器設(shè)備如下:
 1、微量加樣器(覆蓋1-1000ul)
 2、可移動(dòng)紫外燈(近工作臺(tái)面)
 3、消耗品:一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭(帶濾心)
 4、工作服和工作鞋
 5、辦公用品
   為了對以個(gè)特定序列進(jìn)行PCR做重復(fù)檢測,需要三個(gè)不同的區(qū)域,每一個(gè)區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細(xì)列出.
1、樣品準(zhǔn)備區(qū)
這個(gè)區(qū)域?qū)iT用作樣品的準(zhǔn)備,在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采
取預(yù)防措施:
 1)PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。
 2)組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理,以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。
 3)用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具,也不能用作操作靶序列。
 4)DNA樣品應(yīng)該用有專門的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作,以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。
 5)大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無菌一次性移液管吸取。
 6)管子打開前都要簡短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生,而且管子不能用力崩開,這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。
 7)任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套,手套要經(jīng)常更換,尤其在抽提過程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門用于樣品準(zhǔn)備間,經(jīng)常清洗。
2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR
  RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作,這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問題,反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。
3、前PCR區(qū)
  必須有專門用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)的區(qū)域,這個(gè)區(qū)域必須保持干凈,而且沒有來自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備,特別是專門用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。
4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作
 1)所用的所有溶液都應(yīng)該沒有核酸和(或)核酸酶(DNase和RNase)污染。
 2)所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的-新鮮蒸餾的去離子水,用0.22μm過濾的,并且是高壓滅菌。
 3)在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑,在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
 4)所用試劑都應(yīng)該以大體積配制,實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
 5)所有試劑和樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
 6)新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
 7)樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物
 1)可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃,在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。
 2)如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物,以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì),可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
 3)作為一個(gè)規(guī)則,應(yīng)該保存一套陰性、弱陽性和強(qiáng)陽性對照樣品來分析樣品配制和PCR前過程的效率和潔凈程度。而且,你也希望通過使用一個(gè)已知的弱陽性樣品來驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。
 4)陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做,以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染,陰性對照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。
 5)當(dāng)做陽性對照時(shí),有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用zui少數(shù)量的核酸。
 6)由于必須有對照反應(yīng),對照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
6、控制污染的方法
  已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來消除一種形式的污染—使用UNG,這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線,這種方法不能消除污染問題,但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級。
7、PCR儀的位置
8、后PCR區(qū)
  PCR完成以后,需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù),應(yīng)該留出一個(gè)專門用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門用于這一目的,決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)。 

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