脂肪酸色譜分析儀
【執行標準】GB 5009.168-2016 食品安家標準 食品中脂肪酸的測定
GB 5413.27-2010 食品安家標準 嬰幼兒食品和乳品中脂肪酸的測定
【應用原理】
1 水解-提取法:試樣經水解-y醚溶液提取其中的脂肪后,在堿性條件下皂化和甲酯化,生成脂肪酸甲酯,經毛細管柱氣相色譜分析,外標法定量測定脂肪酸的含量。動植物純油脂試樣不經脂肪提取,直接進行皂化和脂肪酸甲酯化
2 乙酰氯-甲醇法(適用于含水量小于5%的乳粉和無水奶油試樣):乙酰氯與甲醇反應得到的鹽酸-甲醇使其中的脂肪和游離脂肪酸甲酯化,用甲苯提取后,經氣相色譜儀分離檢測,外標法定量。
酯交換法(適用于游離脂肪酸含量不大于2%的油脂):將油脂溶解在異辛烷中,加入氫氧化鉀甲醇溶液通過酯交換甲酯化,反應*后,用硫酸氫鈉中和剩余氫氧化鉀,外標法定量測定脂肪酸的含量。
【試劑和材料】
除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T6682規定的一級水。
1 試劑
1.1 鹽酸(HCl)。
1.2 氨水(NH3·H2O)。
1.3 焦性沒食子酸(C6H6O3)。
1.4 y醚(C4H10O)。
1.5 石油醚:沸程30℃~60℃。
1.6 乙醇(C2H6O)(95%)。
1.7 甲醇(CH3OH):色譜純。
1.8 氫氧化鈉(NaOH)。
1.9 正庚烷[CH3(CH2)5CH3]:色譜純。
1.10 sf化硼甲醇溶液,濃度為15%。
1.11 (Na2SO4)。
1.12 氯化鈉(NaCl)。
2 試劑配制
2.1 鹽酸溶液(8.3mol/L):量取250mL鹽酸,用110mL水稀釋,混勻,室溫下可放置2個月。
2.2 y醚-石油醚混合液(1+1):取等體積的y醚和石油醚,混勻備用。
2.3 氫氧化鈉甲醇溶液(2%):取2g氫氧化鈉溶解在100mL甲醇中,混勻。
2.4 飽和氯化鈉溶液:稱取360g氯化鈉溶解于1.0L水中,攪拌溶解,澄清備用。
2.5 氫氧化鉀甲醇溶液(2mol/L):將13.1g氫氧化鉀溶于100mL無水甲醇中,可輕微加熱,加入無
水硫酸鈉干燥,過濾,即得澄清溶液。
3 標準品
3.1 十一碳酸甘油三酯(C36H68O6,CAS號:13552-80-2)。
3.2 混合脂肪酸甲酯標準品。
3.3 單個脂肪酸甲酯標準品:見附錄A。
4 標準溶液配制
4.1 十一碳酸甘油三酯內標溶液(5.00mg/mL):準確稱取2.5g(精0.1mg)十一碳酸甘油三酯
燒杯中,加入甲醇溶解,移入500mL容量瓶后用甲醇定容,在冰箱中冷藏可保存1個月。
4.2 混合脂肪酸甲酯標準溶液:取出適量脂肪酸甲酯混合標準移到10mL容量瓶中,用正庚烷稀
釋定容,貯存于-10℃以下冰箱,有效期3個月。
4.3 單個脂肪酸甲酯標準溶液:將單個脂肪酸甲酯分別從安瓿瓶中取出轉移到10mL容量瓶中,用
正庚烷沖洗安瓿瓶,再用正庚烷定容,分別得到不同脂肪酸甲酯的單標溶液,貯存于-10 ℃以下冰箱,
有效期3個月。
脂肪酸色譜分析儀
【儀器配置清單】
1.勻漿機或實驗室用組織粉碎機或研磨機。
2.氣相色譜儀:GC-2090具有氫火焰離子檢測器(FID)+毛細管進樣口。
自動進樣器：液體自動進樣裝置
色譜工作站：反控版
氣體發生器：氮氫空一體機
3.毛細管色譜柱:聚二氰丙基硅氧烷強極性固定相,柱長100m,內徑0.25mm,膜厚0.2μm。
4.恒溫水浴:控溫范圍40℃~100℃,控溫±1℃。
5.分析天平:感量0.1mg。
6.旋轉蒸發儀。
【脂肪酸測定方法】
1.色譜參考條件
取單個脂肪酸甲酯標準溶液和脂肪酸甲酯混合標準溶液分別注入氣相色譜儀,對色譜峰進行定性。
脂肪酸甲酯混合標準溶液氣相色譜圖,見附錄B。
a) 毛細管色譜柱:聚二氰丙基硅氧烷強極性固定相,柱長100m,內徑0.25mm,膜厚0.2μm。
b) 進樣器溫度:270℃。
c) 檢測器溫度:280℃。
d) 程序升溫:初始溫度100℃,持續13min;
100℃~180℃,升溫速率10℃/min,保持6min;
180℃~200℃,升溫速率1℃/min,保持20min;
200℃~230℃,升溫速率4℃/min,保持10.5min。
e) 載氣:氮氣。
f) 分流比:100∶1。
g) 進樣體積:1.0μL。
h) 檢測條件應滿足理論塔板數(n)少2000/m,分離度(R)少1.25。
2.試樣測定
試樣溶液的測定
3.在上述色譜條件下將脂肪酸標準測定液及試樣測定液分別注入氣相色譜儀,以色譜峰峰面積定量。
脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化
在脂肪提取物中加入2%氫氧化鈉甲醇溶液8mL,連接回流冷凝器,80℃±1℃水浴上回流,直油滴消失。從回流冷凝器上端加入7mL15%溶液,在80 ℃±1 ℃水浴中繼續回流2min。用少量水沖洗回流冷凝器。停止加熱,從水浴上取下燒瓶,迅速冷卻室溫。準確加入10mL~30mL正庚烷,振搖2min,再加入飽和氯化鈉水溶液,靜置分層。吸取上層正庚烷提取溶液大約5mL,25mL試管中,加入大約3g~5g,振搖1min,靜置5min,吸取上層溶液到進樣瓶中待測定
