茄科羅爾斯通氏菌 百歐博偉生物 微生物菌種
茄科羅爾斯通氏菌 百歐博偉生物 微生物菌種
茄科羅爾斯通氏菌是Ralstonia屬的微生物，原產地為中國。形狀不規則、稍凸起、白色、光滑、有光澤、不透明、革蘭氏陰性。主要用途為研究；教學。
一、菌種簡介
平臺編號：Bio-088892
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Ralstonia Solanacearum
中文名稱：茄科羅爾斯通氏菌
拉丁名稱：Ralstonia solanacearum
來源歷史：←中國煙草總公司鄭州煙草研究院
收藏時間：2017-11-30
原始編號：TY2
原產國：中國
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
特征特性：固體培養基上培養時，菌落呈白色，流動性較強。菌體短桿狀，單個或成對排列，革蘭氏陰性?；趦惹衅暇厶敲富?/span>(egl)序列，為演化型I，變種13。
具體用途：用于煙葉青枯病生防研究。
生物危害程度：四類
培養基編號：CM0002
培養基名稱：營養肉汁瓊脂
培養基成分：蛋白胨 5.0g，牛肉浸取物 3.0g，NaCl 5.0g，瓊脂 15.0g，蒸餾水 1.0L，pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O，則有利于產生芽孢。推薦使用商品化成品培養基。
培養溫度：30℃
需氧類型：好氧
分離基物：煙草-煙桿
采集地：江西省撫州市南豐縣
保存方法：-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：用于煙葉青枯病生防研究。
注意事項：僅用于科學研究或者工業應用等非醫療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）
二、培養方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業發酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經過擴大培養成為具有一定數量和質量的純生產菌種的制備過程。以作接入發酵罐中進一步擴大菌體量及合成產物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備 菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產菌種，用無菌手續挑取少許，接入瓊脂斜面培養基上，在25℃（或較高溫度）下培養5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數采用大米、小米之類的天然培養基）。
5、將培養成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養基上，于25～28℃培養14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產上延續使用半年左右。
6、如果有些生產菌種不產孢子，如赤霉素產生菌或產孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、使用范圍
（1）合成培養基。合成培養基的各種成分是已知的各種化學物質。這種培養基的化學成分清楚，組成成分精確，重復性強，而且微生物在這類培養基中生長較慢。如高氏一號合成培養基、察氏（Czapek）培養基等。
（2）天然培養基。由天然物質制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養霉菌，后者用于培養細菌。這類培養基的化學成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養豐富，培養效果好，所以常被采用。
（3）半合成培養基。在天然有機物的基礎上適當加入已知成分的無機鹽類，或在合成培養基的基礎上添加某些天然成分，如培養霉菌用的。這類培養基能更有效地滿足微生物對營養物質的需要。
四、保存方法
1、傳代保存法：培養基的濃度不宜過高,營養成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養溫度通常以稍低于生長溫度為好。若為產酸菌種,則應在培養基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
①蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發。
②糖液保存法：適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：①土壤保存法;②砂土保存法;③硅膠保存法;④磁珠保存法;⑤麩皮保存法;⑥紙片(濾紙)保存法。
5、常用的冷凍保存法：
①低溫冰箱保存法(-20℃、-50℃或-85℃)：低溫冷凍保存時使用螺旋口試管較為方便,也可在棉塞試管外包裹塑料薄膜。保存時菌液加量不宜過多,有些可添加保護劑。此外,也可用φ5mm的玻璃珠來吸附菌液,然后把玻璃珠置于塑料容器內,再放入低溫冰箱內進行保存的。
②干冰保存法(-70℃左右)：即將菌種管插入干冰內,再置于冰箱內進行冷凍保存。
③液氮保存法(-196℃)：是適用范圍的微生物保存法。
五、微生物菌種的培養
1、孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養基，培養基中含有一些適合產孢子的營養成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營養環境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營養可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養溫度大多數為28 ℃，少數為37 ℃，培養時間為5～14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養基。這是由于這些農產品中的營養成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養一般為25～28 ℃，培養時間為4～14天。
2、種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進罐，常采用母瓶、子瓶兩級培養，有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養基要求比較豐富，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養成分不宜過濃，子瓶培養基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程，因菌種不同而異，一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經培養后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為一級種子，把一級種子轉入發酵罐內發酵，稱為二級發酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內，經過培養形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級種子，將二級種子轉入發酵罐內發酵，稱為三級發酵。同樣道理，使用三級種子的發酵，稱為四級發酵。
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