真菌毒素檢測介紹
真菌毒素：又稱霉菌毒素，是一類無色、 無嗅、無味的化合物。霉菌毒素是霉菌在其所污染的食品中產生的有毒代謝產物。
真菌毒素廣泛污染農作物、 食品及飼料等植物源產品。不僅能導致農產品霉敗變質，營養物質損失，品質降低，更嚴重的危害是被污染的糧食和飼料將誘發動物以及人 類腫瘤發生。
在我國農產品及飼料中常見的、危害較大的真菌毒素有黃曲霉毒素、嘔吐毒素（脫氧雪腐鋪刀菌烯醇 ）、玉米赤霉烯酮／ZEN、伏馬菌素、 豬曲霉毒素A等，這些毒素對農產品及飼料的污染在2002 年被世界衛生組織列為食源性疾病的重要根源。我國相關標準對食品(GB27 61- 2017) 和飼料 (GB 13078-2017) 中的真菌毒素*檢測都做出了明確的規定，另外2020 版藥典也提出了6類真菌毒素在中藥檢測中的要求。隨著社會對食品安全重視越來越強，真菌毒素檢測需求持續增加。
真菌毒素免疫親和柱凈化機理
免疫親和柱利用抗原抗體特異性可逆結合的原理，將毒素杭體與凝膠共價結合，然后填充柱子。將樣品提取溶液過 免疫親和柱，與抗體分子有特異性結合的被固定，而非目標化合物則沿柱流出，再用甲醇將洗脫，根據待測物分子熒光特性，用專用定量熒光速測儀進行定量檢測。
一，樣品制備
參考《GB 5009.22-2016食品安全國家標準食品中黃曲霉鑿素B族和G族的測定》。
1, 均質
準確稱取20.0g粉碎的樣品，加入100ml 70％甲醇 水（體積比）混勻，以均質器高速攪拌提取2min或振蕩提取30min;
2, 提取
提取液用玻璃纖維濾紙過濾或5000r/min離心Smin，取10ml濾液加入20ml水稀釋，混勻；
3, 過濾
用快速定性濾紙或玻璃微纖維濾紙或定量濾紙過濾，收集濾液，取15ml
注意：對千樣品提取液(pH<6或pH>8)的樣品， 需調節pH至中性， 并用玻璃微纖維濾紙／定量濾紙過濾； 對千渾濁難過濾的樣品， 可用離心機離心使其分層
二, 樣品凈化
注意：整個純化過程盡量不要讓柱子液體流干！
1）取出免疫親和層析微柱，將上方塞子取出剪斷， 再插回親和柱上
2）將柱子與泵流操作架上的玻璃針筒連接固定，去掉親和柱下方堵頭，用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌1次，流速1.5ml/min;
3）將處理后的溶液上樣， 使 液體以1.5 ml/min的速度流出；
4）用15ml水或pH7.4磷酸鹽緩沖溶液(PBS)洗滌2次，流速1.5ml/min, 直至2~3mL空氣通過柱體，保證柱子內沒有殘余液體
5）用1ml甲醇洗脫，用樣品瓶／玻璃試管接洗脫液， 流速1ml/min;
6）脫后液體可用于檢測。
真菌毒素免疫親和柱免疫親和柱操作示意圖
注意事項
1）對人體有害，應戴手套操作。凡接觸到標樣的玻璃器皿都要用5％次氯酸鈉浸泡過夜。
2）不要使用過有效期的免疫親和柱。
3）免疫親和柱應在2~8它保存，不要冷凍。
4） 使用前，免疫親和柱需至少提前半小時回溫至室溫(25℃左右）。
5）樣本AFB1含量高千柱容量時，需適當降低上樣體積。
6）要保證過柱的樣品提取液pH在6~8之間，可用鹽酸或氫氧化鈉調整。
7）稱取的樣品量以及提取液的體積可根據實際情況按比例調整，建議不少于1
保質期
1）4℃下保存期可長達兩年；
2）生產日期見外包裝盒
真菌毒素免疫親和柱B1的檢測
測定條件
色譜柱：Shim-pack GIST C18um, 4.6x250mm?(P/N: 227-30017-08)
流動相：甲醇：水＝45: 55 (V: V)
流速： 1.0 mUmin
檢測波長：激發波長360nm , 發射波長440nm
進樣量：10 µL
柱溫：25℃
真菌毒素免疫親和柱ShimsenIAC產品特點
高度特異性單克隆抗體，具有高吸附能力；
柱容量大，提高了純化效率；
易洗脫，達到低濃度樣本濃縮效果
樣品回收率穩定在78 % -9 5 %
樣品回收率穩定在78% -95%
樣品回收率穩定在78 % -9 5 % 純化樣品適用
于ELISA法，HPLC法等。
