己糖激酶（HK）紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒公司正在出售的產(chǎn)品：載玻細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次
冰凍切組織CDK4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次
石蠟切組織CDK4蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒 10/20次
細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒 10/50 次
細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒 10/50 次
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | |
規(guī)格 | 50管/48樣 |
檢測(cè)方法 | 紫外分光光度法 |
貨號(hào) | GOY-01S6602 |
商品介紹：
測(cè)定意義
HK（EC 2.7.1.1）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是葡萄糖分解過(guò)程中的第一個(gè)關(guān)鍵酶，催化葡萄糖轉(zhuǎn)化為6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途徑的交叉點(diǎn)。
測(cè)定原理
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步催化6-磷酸葡萄糖脫氫生成NADPH，NADPH在340nm有特征吸收峰。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制： 市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤(rùn)管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些。可以取0.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。 肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤(rùn)管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動(dòng)，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。 | 二、血液樣本的收集： 全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。 1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。 2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA。 |
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
人促有絲分裂因子Bacillus subtilis subsp. subtilis整合素αVβ3檢測(cè)試劑盒
人轉(zhuǎn)錄因子抗體-1Bacillus subtilis subsp. subtilis整合素結(jié)合唾液蛋白檢測(cè)試劑盒
人抗鼠抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis正常T表達(dá)和分泌因子檢測(cè)試劑盒
人鈣離子通道抗體Bacillus subtilis subsp. subtilis脂阿拉伯甘露聚糖檢測(cè)試劑盒
人溴脫氧核苷尿嘧Bacillus subtilis subsp. subtilis脂蛋白α檢測(cè)試劑盒
人纖維母表面抗原Bacillus subtilis subsp. subtilis脂蛋白磷脂A2檢測(cè)試劑盒
人分泌性白蛋白抑制因子Bacillus subtilis subsp. subtilis脂蛋白脂檢測(cè)試劑盒
人阿黑皮素原Bacillus subtilis subsp. subtilis脂多糖；內(nèi)素檢測(cè)試劑盒
己糖激酶（HK）紫外分光光度法檢測(cè)試劑盒氫二,三水 99.99% metals basisP抗體AQP2 水通道蛋白-2抗體
二氫 for cell culture, for insect cell culture，≥99%絲氨/蘇氨激蛋白PIM1+PIM3抗體AQP1/CHIP 水通道蛋白1抗體
二氫 for plant cell culture, ≥99%胞漿蛋白PACSIN3抗體AQP0/MIP26 水通道蛋白0抗體
二氫 for molecular biology, ≥99%跨膜接頭蛋白PAG抗體AP-TNAP/ALPL 堿性抗體
二氫 for HPLC，≥99.5% (T)PARD6G蛋白抗體APS APS抗體
三聚鈉 AR,98%胎盤蛋白6抗體APRIN/PDS5B 雄激素誘導(dǎo)增殖抑制蛋白抗體
三聚鈉 CP,97%肌3激接頭蛋白1抗體APR3/C2orf28 凋亡相關(guān)蛋白3抗體
二氫鈉 ARPRAM1蛋白抗體APPL1 銜接因子蛋白含pH域酪氨結(jié)合域和亮氨拉鏈蛋白1抗體
二氫鈉 CP廣譜角蛋白PCK抗體APPD/LAPF 凋亡誘導(dǎo)蛋白D抗體
二氫鈉 用于分子生物學(xué), ≥99.0% (T)Rho鳥甘轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體APP695 (CT) 淀粉樣肽前體蛋白抗體（C端）
二氫鈉 ACS化脂酰肌激抗體APP/ABPP 淀粉樣肽前體蛋白抗體
無(wú)水二氫鈉 AR,99.0% 化帕金蛋白抗體APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體
無(wú)水二氫鈉 CP,98.0%化帕金蛋白抗體Apoptosis enhancing nuclease 凋亡增強(qiáng)核抗體
無(wú)水二氫鈉 99.999% metals basis化血小板源性生長(zhǎng)因子受體B抗體Apollon/BIRC6 Apollon凋亡抑制蛋白抗體
無(wú)水二氫鈉 用于分子生物學(xué), ≥99%化血小板源性生長(zhǎng)因子受體B抗體APOL6 載脂蛋白樣蛋白6抗體
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過(guò)高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。
6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。
7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。
