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培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱：Lck/Src抑制劑(WH-4-023)
英文名稱：WH-4-023
產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X11015
產品介紹:
WH-4-023是一種有效的選擇性的Lck/Src抑制劑，IC50分別為2nM/6nM，對p38α和KDR作用效果稍弱。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：837422-57-8 別名：Dual LCK/SRC inhibitor 純度：99.47% 分子量：568.67 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
紅色蠟蘑Pseudomonas fluorescens大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)
黑根霉Pseudomonas fluorescens大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
根霉Pseudomonas fluorescens大鼠結合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)
釀酒酵母Pseudomonas fluorescens大鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)
阿舒多囊霉Pseudomonas fluorescens大鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)
蓋氏假單胞菌Pseudomonas fluorescens大鼠內皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
伯克霍爾德氏菌屬Pseudomonas fluorescens大鼠內皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)
膠孢Pseudomonas fluorescens大鼠膽固酯轉移蛋白(CETP)
生活飲用水 大腸埃希氏菌Pseudomonas fluorescens大鼠膽固酯轉移蛋白(CETP)
青霉 Pseudomonas fluorescens大鼠血管緊張原(aGT)
類銀白紫絲膜菌Pseudomonas fluorescens大鼠血管緊張原(aGT)
Pseudomonas fluorescens大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)
黑木耳Pseudomonas fluorescens大鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)
損蘑菇紫色桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠二(MDA)
枯草芽胞桿菌Pseudomonas fluorescens大鼠二(MDA)
洛斯里被毛孢Pseudomonas fluorescens大鼠超氧化物歧化(SOD)
蛋白酪磷-1B抗體芒果囊孢菌屬過氧化氫(CAT)比色法測試盒
野生型P53誘導基因1單克抗體紅褐肉座菌過氧化物(GSH-Px)比色法測試盒
蛋白質精甲基轉移1抗體松色二胞菌過氧化物(POD)比色法測試盒(測植物)
磷化蛋白激樣內質網激抗體柳屬半明小黑腐皮殼菌抗壞血過氧化物(APX)比色法測試盒
Lck/Src抑制劑(WH-4-023)地衣芽孢桿 BOC-L-天門冬β-芐酯
紫色紅曲霉 竹紅
毛木耳 芴甲氧羰基-N-三苯甲基-L-天冬酰
土曲霉原變種 4',5,8-三羥基-3',6,7-氧基黃酮
蠟狀芽孢桿 延命草
維氏氣單胞 BOC-N-β-Trityl-L-天門冬酰
新生隱球 疏展香茶菜寧B
芹側耳（杏鮑菇） Nα-FMOC-Nω-PBF-D-精
苔蘚隱球酵母 8-羥基松脂
乳桿屬 小構樹A
蘇云金芽孢桿 5,7-二甲氧基-3,3',4'-三羥基黃酮
泡盛曲霉 (-)-表松脂
短桿狀馬賽 環桑
屎腸球 植鈣
細黃鏈霉 (-)-二氫槲皮
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
